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1 Serum-free Systems Endothelial cells line blood vessels and the internal cavities of the heart. They display a flattened, polygonal form and adhere to each other by desmosomes and tight-junctions. With a total number of about 10 12 cells, the endothelium is one of the biggest organs of the body and plays a key role in many physiological and pathophysiological processes. A number of factors control proliferation and apoptosis of endothelial cells, thereby regulating maintenance, degeneration, or regeneration of blood vessels. New blood vessel formation occurs via angiogenesis or vasculogenesis, a process restricted to embryonic development. In 1997, postnatal vasculogenesis has been proposed as an important mechanism for angiogenesis via blood or bone marrow derived circulating progenitor endothelial cells (PEC) (Asahara et al, Science 1997). PEC have been extensively studied as potential cell therapy for the repair of damaged blood vessels. Animal studies clearly demonstrated that administration of PEC partially rescued cardiovascular dysfuntion or myocardial injury with evidence for PEC contribution to new vessel growth. While controversy exists as to the identity of endothelial cell progenitors, recently a PEC population has been identified which shows expression of typical endothelial as well as progenitor markers (Ingram et al, Blood. 2004;104:2752-2760). Importantly, these cells have been tested for a high proliferative potential in clonogenic assays and characterized by formation of functional blood vessels in vivo (Yoder et al, Blood. 2007;109:1801-1809). With endothelial cell progenitors rapidly moving into the field of interest for vascular tissue engineering with potential therapeutic application, the presence of whole animal serum or animal-derived components in culture media is undesirable for a cell therapeutic approach. Product Description: PowerStem PEC1 ready-to-use (P04-777500) is a specially developed medium for a serum- and xeno-free in vitro culture of human progenitor endothelial cells (hPEC) containing all components necessary for optimal colony formation, clonogenic growth, and rapid proliferation. It is designed for use in an incubator at 37 °C with a 5% CO2 atmosphere. Please avoid repeated warming of complete medium. Prepare only the amount needed in a separate sterile tube. For a T25 cell culture flask it is recommended to use 5 ml of PowerStem PEC1. For smaller or larger culture area, please adjust volume accordingly. When cells have been thawed, change the medium after 24 h to remove un-attached cells; for maintenance and propagation, change the medium every two or three days; for cultures close to confluence or for maximum proliferative response, it is recommended to use more medium or more frequent changes. Store at 2 - 8 °C in the dark. Expiry: 3 months. 1.63 Serum-freie Systeme PowerStem PEC1/PowerStem PEC1 Endothelzellen kleiden Blutgefäße und das Innere der Herzhöhlen aus. Sie haben eine stark abgeflachte, polygonale Form und ruhen meistens auf einer Basalmembran. Das Endothel ist mit ca. 10 12 Zellen eines der größten Organe des Körpers und spielt bei vielen physiologischen und pathophysiologischen Prozessen eine Schlüsselrolle. Eine Vielzahl löslicher Faktoren steuern Proliferation und Apoptose von Endothelzellen und regulieren auf diese Weise zum Beispiel die Neu- oder Rückbildung von Blutgefäßen. Die Bildung neuer Blutgefäße erfolgt durch Angiogenese oder Vaskulogenese. Letzteres wurde lange als ein auf die Embryonal-Entwicklung beschränkter Prozess betrachtet. Im Jahre 1997 wurde die postnatale Vaskulogenese als ein wichtiger Mechanismus der Blutgefäßneubildung beschrieben. Dafür sollen aus dem Blut oder dem Knochenmark stammende endotheliale Progenitorzellen (PEC) verantwortlich sein (Asahara et al, Science 1997). Als Folge dieser Entdeckung wurden PEC intensiv als mögliche Zelltherapie zur Reparatur geschädigter Blutgefäße untersucht. Die Anwendung von PEC in Tierversuchen zeigte eine Verbesserung der kardiovaskulären Dysfunktion oder eine Reparatur von Herzinfarkten mit Anzeichen für eine Beteiligung von PEC bei Blutgefäßneubildung. Es bestehen zurzeit noch unterschiedliche Meinungen bezüglich der Identität von PEC. Umfassende Vergleichsanalysen haben eine neue PEC Population definiert, die sowohl typische endotheliale als auch Progenitorzell-Marker exprimiert (Ingram et al, Blood. 2004). Zusätzlich wurde ein hohes klonogenes Proliferationspotential und die Bildung funktionaler Blutgefäße in vivo für diese Zellen nachgewiesen (Yoder et al, Blood. 2007). Da endotheliale Progenitorzellen verstärkt ins Blickfeld der therapeutischen Anwendung beim vaskulären Tissue Engineering rücken, ist die Anwesenheit von Serum oder sonstigen tierischen Bestandteilen in Zellkulturmedien bei der Erforschung möglicher zelltherapeutischer Ansätze unerwünscht. Produktbeschreibung: PowerStem PEC1 ready-to-use (P04-777500) ist ein gebrauchsfertiges, serum-freies Komplettmedium für die in vitro Kultur humaner endothelialer Progenitorzellen (hPEC) unter Xeno-freien Bedingungen. Es enthält alle Komponenten für optimale Koloniebildung, klonogenes Wachstum und eine schnelle Expansion. PowerStem PEC1 ist formuliert für die Verwendung in einem Brutschrank mit 5% CO2. Bitte vermeiden Sie wiederholtes Erwärmen und Abkühlen. Die für das Arbeiten benötigte Menge an Medium sollte in einem separaten, sterilen Gefäß erwärmt werden. Für eine T-25 Flasche benötigen Sie z.B. 5 ml Medium, bei anderen Kulturgefäßen der Wachstumsfläche entsprechend mehr oder weniger. Es wird empfohlen, das Medium alle 2-3 Tage zu wechseln. Direkt nach dem Auftauen von Zellen sollte das Medium nach ca. 24 h gewechselt werden. Bei Erreichen der Konfluenz oder für maximale Proliferation empfiehlt sich ein häufigerer Medienwechsel bzw. die Zugabe entsprechend größerer Menge. Lagertemperatur: 2 - 8 °C. Haltbarkeit: 3 Monate. BIOTECH GmbH
Serum-free Systems PowerStem PEC1 kit (P04-77750K) is provided with supplements (pre-screened and tested for progenitor cells) in separate sterile packing. This will enable the user to prepare a medium for special application. For example, VEGF, FGF-2, or other components may be omitted from the complete medium for specific experimental settings. Please note that such a formulation will not promote optimal cell growth. Therefore, this composition can not be used for routine long-term culture of PEC. Please make sure that sterility is not compromised when adding individual components to prepare complete medium. The medium should be carefully but thoroughly mixed after addition of all components to assure a homogeneous solution. Store basal or complete medium at 2 - 8 °C and store supplements at -20 °C. Expiry: 6 months. Basal medium (w/o supplements) or complete/readyto-use medium should not be frozen! WARNING: PowerStem PEC1 is not suited for stopping trypsin reaction. Please use trypsin inhibitor solution (P10- 033100) to neutralize trypsin. To avoid damage to cells, progenitor endothelial cells should be exposed only for a minimum period of time to trypsin. Product intended use: FOR RESEARCH USE ONLY! Not approved for human or animal diagnostic or therapeutic procedures. PowerStem PEC1 is suitable for the culture of: Human Umbilical Cord Blood Progenitor Endothelial Cells Human Adult Peripheral Blood Progenitor Endothelial Cells Human Bone Marrow-derived Progenitor Endothelial Cells Quality Control: Each batch of PowerStem PEC1 is tested for its proliferation promoting capacity on freshly isolated primary human cord blood progenitor endothelial cells to guarantee optimum performance and reliability. In addition, the medium is tested for absence of microbial contamination (bacteria, yeast, fungi, mycoplasma). References: a) Asahara T et al. (1997) Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science 275:964 b) Ingram DA et al. (2004) Identification of a novel hierarchy of endothelial progenitor cells using human peripheral and umbilical cord blood. Blood 104:2752 c) Yoder MC et al. (2007) Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals. Blood 109:1801 For more references see www.pan-biotech.de. BIOTECH GmbH 1.64 Serum-freie Systeme PowerStem PEC1/PowerStem PEC1 PowerStem PEC1 kit (P04-77750K) enthält Wachstumsfaktoren und zusätzliche Supplemente in individueller steriler Verpackung. Mit dieser Variante kann für bestimmte Fragestellungen vom Anwender die Abwesenheit einzelner Komponenten (z.B. VEGF, FGF-2, etc) erreicht werden. Diese Variante ermöglicht keine optimale Zellproliferation, und eine derartige Formulierung ist nicht geeignet für eine Langzeitkultur von PEC. Bei Zugabe der einzelnen Komponenten ist auf steriles Arbeiten zu achten. Nach vollständiger Supplementierung sollte das Komplettmedium vorsichtig aber gründlich gemischt werden, um eine gleichmäßige Verteilung zu erreichen. Lagertemperatur: 2 - 8 °C (Supplemente -20 °C). Haltbarkeit: 6 Monate für kit Komponenten, 3 Monate für Komplettmedium. PowerStem PEC1 Basal- oder Komplettmedium sollten nicht gefroren werden! ACHTUNG: PowerStem PEC1 ist zum Abstoppen der Trypsinreaktion ungeeignet. Benutzen Sie dafür bitte Trypsininhibitor (P10-033100). Um eine Schädigung der Zellen zu vermeiden, sollte die Exposition in Trypsin so kurz wie möglich gehalten werden. Anwendung: Nur für Forschungszwecke! Keine Verwendung bei Mensch oder Tier in diagnostischen oder therapeutischen Anwendungen. PowerStem PEC1 eignet sich für die Kultivierung von humanen endothelialen Progenitorzellen aus Nabelschnurblut, adultem Peripherblut oder Knochenmark. Qualitätskontrolle: Jede Charge PowerStem PEC1 wird bezüglich ihrer wachstumsfördernden Wirkung an frisch isolierten Progenitor- Endothelzellen getestet. Zusätzlich werden Tests auf Abwesenheit von Kontamination (Bakterien, Pilze, Mycoplasma) durchgeführt. Literatur: a) Asahara T et al. (1997) Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science 275:964 b) Ingram DA et al. (2004) Identification of a novel hierarchy of endothelial progenitor cells using human peripheral and umbilical cord blood. Blood 104:2752 c) Yoder MC et al. (2007) Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals. Blood 109:1801 Für weitere Literatur siehe www.pan-biotech.de. PowerStem PEC1 ready-to-use 500 ml P04-777500 PowerStem PEC1 kit 500 ml P04-77750K 1
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