Der NEUE Katalog ist da! - PRO PUBLIC GmbH

Serum-free Systems
Preparation of PowerStem ESPro1 medium:
PowerStem ESPro1 basal medium requires supplementation
with PowerStem ESPro1 growth supplement and PowerStem
ESPro1 LIF supplement. To obtain 500 ml PowerStem ESPro1
complete medium please add 50 ml of thawed PowerStem
ESPro1 growth supplement and 1ml PowerStem ESPro1 LIF
supplement to 450 ml of PowerStem ESPro1 basal medium.
Instructions for use:
• Prepare gelatine-coated plates by covering them with
a 0.2% gelatine solution for at least 10 min in the
incubator.
• mES-cells should always be kept at a relatively high
cell density to maintain their pluripotency.
• The subculture is best carried out from a sub-confluent
culture (70% - 80% confluence).
• Individual colonies should not touch each other.
• Too dense growth promotes the differentiation of cells
and thus may cause the loss of pluripotency.
• Trypsinate mES-cells in the usual procedure (e.g. 0.25%
trypsin solution).
• Once the cells have become round and detach from
the surface (the process can be speeded at 37 °C),
resuspend them in DPBS by thoroughly pipetting up
and down several times and centrifuge for 5 min at
180g at room temperature.
• Evacuate supernatant sterile and remove it.
• Resuspend cell pellet in DPBS again by pipetting up
and down several times.
• Good dissociation of the cells is important, the goal
being to obtain single cells or very small aggregates of
only 2-3 cells. Larger cell clumps should not remain.
• Due to the serum-free formulation of PowerStem
ESPro1, there is no trypsin inactivating effect of FBS;
use trypsin-inhibitor to stop trypsin activity.
• Count cells and plate them on gelatine-coated culture
dishes in PowerStem ESPro1
• Incubate the cells in the usual way in an incubator at
37 °C and 5% CO 2 .
• Feed cells with fresh PowerStem ESPro1 every second
day.
• The cells should be split at ratios between 1:4 and 1:8
depending on the growth rates.
Please note: For differentiation studies LIF supplement
must be omitted.
mES-cells in PowerStem ESPro1
mES-Zellen inPowerStem ESPro1
BIOTECH GmbH
1.50
Serum-freie Systeme
PowerStem ESPro1 /PowerStem ESPro1
JM8-cells in PowerStem ESPro1
JM8-Zellen in PowerStem ESPro1
Zubereitung von PowerStem ESPro1 Medium:
PowerStem ESPro1 Basal Medium wird mit PowerStem ESPro1
Growth Supplement und PowerStem ESPro 1 LIF Supplement
ergänzt. Um 500 ml PowerStem ESPro1 Komplettmedium zu
erhalten, geben Sie 50 ml des aufgetauten PowerStem ESPro1
Growth Supplement und 1 ml PowerStem ESPro1 LIF
Supplement zu 450 ml des PowerStem ESPro1 Basal Medium.
Gebrauchsanweisung:
• Bereiten Sie Gelatine-beschichtete Kulturgefäße vor,
indem Sie diese mit einer 0,2% Gelatinelösung für mindestens
10 Minuten im Inkubator bedecken.
• mES-Zellen sollten immer in einer relativ hohen Zelldichte
gehalten werden, um die Pluripotenz zu erhalten.
• Die Subkultur wird am besten von einer subkonfluenten
Kultur durchgeführt (70% - 80% Konfluenz).
• Einzelne Kolonien sollten sich nicht gegenseitig berühren.
• Zu dichtes Wachstum fördert die Differenzierung der
Zellen, wodurch ein Verlust der Pluripotenz verursacht
werden könnte.
• Trypsinieren Sie mES-Zellen im gewohnten Verfahren (z.B.
0,25% Trypsinlösung).
• Sobald die Zellen rund sind und sich von der Oberfläche
ablösen (dies kann bei 37 °C beschleunigt werden),
resuspendieren Sie diese in DPBS, indem Sie einige Male
gründlich auf und ab pipettieren und für 5 Minuten bei
180x g bei Raumtemperatur zentrifugieren.
• Entfernen Sie den Überstand steril.
• Resuspendieren Sie die Zellpellets nochmals in DPBS,
indem Sie einige Male auf und ab pipettieren.
• Eine gute Auftrennung der Zellen ist wichtig; das Ziel ist,
einzelne Zellen oder sehr kleine Aggregate von nur 2-3
Zellen zu bekommen. Größere Zellklumpen sollten nicht
übrig bleiben.
• Aufgrund der serum-freien Formulierung von PowerStem
ESPro1 gibt es keinen Inaktivierungseffekt von FBS für
Trypsin; verwenden Sie deshalb Trypsin-Inhibitor um die
Trypsinaktivität vollständig zu neutralisieren.
• Zählen Sie die Zellen und geben Sie diese mit PowerStem
ESPro1 in Gelatine-beschichtete Kulturgefäße.
• Inkubieren Sie die Zellen auf gewohnte Art und Weise in
einem Inkubator bei 37 °C und 5% CO 2 .
• Füttern Sie die Zellen jeden zweiten Tag mit frischem
PowerStem ESPro1.
• Abhängig von der Wachstumsphase sollten die Zellen im
Verhältnis von 1:4 oder 1:8 geteilt werden.
Bitte beachten Sie: Für die Differenzierung der mES Zellen
muss das LIF Supplement weggelassen werden.
mES-cells in medium with 10% FBS
mES-Zellen in Medium mit 10 % FBS
PowerStem ESPro 1 with LIF / mit LIF 100 ml Kit P04-7701K
500 ml Kit P04-77010K
PowerStem ESPro 1 without LIF / ohne LIF 100 ml Kit P04-7751K
500 ml Kit P04-77510K
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