FITOSANIDAD vol. 11, no. 3, septiembre 2007DESARROLLO DEL DIAGNÓSTICO DE VIRUS, VIROIDESY FITOPLASMAS EN CUBA Y SU APLICACIÓN PRÁCTICAGloria González Arias<strong>Instituto</strong> <strong>de</strong> <strong>Investigaciones</strong> <strong>de</strong> <strong>Sanidad</strong> <strong>Vegetal</strong>. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudad<strong>de</strong> La Habana, CP 11600, gonzalez@inisav.cuRESUMENDiversas son las técnicas para la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> virus, viroi<strong>de</strong>s yfitoplasmas, <strong>de</strong>sarrolladas en <strong>de</strong>pen<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong>l conocimiento <strong>de</strong> lacomplejidad <strong>de</strong> estos microorganismos, <strong>de</strong> la aparición <strong>de</strong> enfermeda<strong>de</strong>semergentes y <strong>de</strong>l surgimiento <strong>de</strong> las reemergentes, muchas<strong>de</strong> ellas <strong>de</strong> origen exótico, que merecen la puesta a punto <strong>de</strong> técnicas<strong>de</strong> alto rigor científico. El objetivo <strong>de</strong> la ejecución <strong>de</strong> estas técnicasno es solo elevar la capacitación científico-técnica <strong>de</strong> los investigadores,especialistas y técnicos, sino contar con los medios y métodosnecesarios para dar respuesta práctica a la producción agrícolay garantizar la liberación <strong>de</strong> materiales en el mejor estado fitosanitarioposible. En este documento se hace un recuento hasta hoy <strong>de</strong>l <strong>de</strong>sarrollo<strong>de</strong> estas técnicas en Cuba. Esta temática continuará su enriquecimientoa medida que los a<strong>de</strong>lantos científicos y otras técnicas yvariantes surjan para que también sean adoptadas.Palabras claves: virus, viroi<strong>de</strong>s, fitoplasmas, diagnósticoABSTRACTThere is a great variety of techniques to <strong>de</strong>termine the existence ofviruses, viroids and phytoplasms which have been <strong>de</strong>veloped takinginto account the complexity of these microorganisms, the existenceof emergent diseases and the appearance of the re emergent ones,many of which are from exotic origin and <strong>de</strong>serve accurate techniquesat a high scientific level. The objective of these techniques is not onlyto raise the scientific-technical background knowledge of researchers,specialists and technicians but also to make possible to count on thenecessary methods and special equipment to be able to offer apractical solution to agricultural production, and to guarantee testedmaterials in the best possible phytosanitary condition. In this paperyou will find a record of the techniques <strong>de</strong>veloped in Cuba up to thismoment. This topic will be enriched according to further scientificprogress and other techniques or variants that could appear to beadopted as it has been done up to these days.Key words: virus, viroids, phytoplasm, diagnosisINTRODUCCIÓNLas técnicas para el diagnóstico <strong>de</strong> fitopatógenos, entrelos que están comprendidos los virus, viroi<strong>de</strong>s yfitoplasmas, se han <strong>de</strong>sarrollado mundialmente en losúltimos años y han ganado en rapi<strong>de</strong>z, confiabilidad,sensibilidad y repetibilidad, aspectos básicos que caracterizanun verda<strong>de</strong>ro diagnóstico y que han permitidoel esclarecimiento <strong>de</strong> la etiología <strong>de</strong> nuevas enfermeda<strong>de</strong>s,han facilitado la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> patógenosexóticos y han asegurado el estado fitosanitario <strong>de</strong> productosagrícolas <strong>de</strong>stinados al comercio, que cada díaestablece requerimientos más exigentes y limitantes.En general, la adopción <strong>de</strong> una u otra técnica está dadapor la complejidad y características <strong>de</strong> los patógenos,reflejados en los nuevos conocimientos aportados por loscientíficos en los sistemas taxonómicos, principalmente<strong>de</strong> virus, los que también se han revisado y enriquecido.En Cuba se cuenta con el sistema nacional <strong>de</strong> sanidadvegetal, que compren<strong>de</strong> los 14 laboratorios provinciales<strong>de</strong> sanidad vegetal (Laprosav), el <strong>Instituto</strong> <strong>de</strong> <strong>Investigaciones</strong><strong>de</strong> <strong>Sanidad</strong> <strong>Vegetal</strong> (Inisav) y diferentescentros <strong>de</strong> investigación que <strong>de</strong>s<strong>de</strong> años atrás han<strong>de</strong>sarrollado e implantado técnicas <strong>de</strong>s<strong>de</strong> las más rutinariashasta las más reconocidas en el or<strong>de</strong>n científico-técnicointernacional, y que a la vez se han introducidopoco a poco en la práctica agrícola para elfortalecimiento <strong>de</strong> los sistemas <strong>de</strong> manejo integrado<strong>de</strong> plagas en cultivos priorizados para la economía cubana.En este documento se recorre el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> las técnicas<strong>de</strong> diagnóstico <strong>de</strong> virus, viroi<strong>de</strong>s y fitoplasmasen Cuba, <strong>de</strong>s<strong>de</strong> las más convencionales hasta las <strong>de</strong>avanzada, las que han apoyado la culminación exitosa<strong>de</strong> trabajos <strong>de</strong> tesis <strong>de</strong> doctorado <strong>de</strong> muchos <strong>de</strong> losinvestigadores cubanos en la rama <strong>de</strong> la virologíavegetal, y que han mostrado un nivel científico alto,en concordancia con las ten<strong>de</strong>ncias internacionalesactuales.fitosanidad/11
Evolución <strong>de</strong> la taxonomía y nomenclatura<strong>de</strong> virus, viroi<strong>de</strong>s y fitoplasmasEl objetivo <strong>de</strong> la taxonomía <strong>de</strong> los virus es conciliar elprocesamiento <strong>de</strong> la información que emana <strong>de</strong> dos sistemas,que son la biología y la lógica, <strong>de</strong> la forma másarmónica posible [Del Valle di Feo, 2006], y aunque es<strong>de</strong> reciente surgimiento, constituye una disciplina esencialen el trabajo <strong>de</strong>l virólogo.Los primeros intentos <strong>de</strong> los científicos en tratar <strong>de</strong>or<strong>de</strong>nar <strong>de</strong> alguna forma la gran variedad <strong>de</strong> virus vegetalesdata <strong>de</strong> la primera mitad <strong>de</strong>l siglo XX, cuandosimplemente se mencionaba el género <strong>de</strong> la especie en elque se había <strong>de</strong>tectado el patógeno, seguido <strong>de</strong>l síntomamás notable que inducía [Johnson, 1927, citado porDel Valle di Feo, 2006]. Más tar<strong>de</strong> este sistema se modificó<strong>de</strong> manera que al nombre genérico <strong>de</strong> la especie, enla que por primera vez se había <strong>de</strong>tectado el agente viral,se le adicionaba la palabra virus y un número, comoNicotiana virus 1 [Smith, 1937, citado por Del Valle diFeo, 2006]. Posteriormente se informa una nomenclaturaque se basaba en dos partes. La primera se referíaal nombre <strong>de</strong>l virus, y la segunda era una informacióncodificada, la que se adaptaba como resultado <strong>de</strong> unaacumulación <strong>de</strong> caracteres <strong>de</strong>l virus en cuestión y queconsistió en un criptograma con cuatro pares <strong>de</strong> símbolos.Al primer par le correspon<strong>de</strong> el tipo <strong>de</strong> ácido nucleico/ca<strong>de</strong>na <strong>de</strong> ácido nucleico; al segundo el peso molecular<strong>de</strong>l ácido nucleico/porcentaje <strong>de</strong> partículas infecciosas<strong>de</strong> ácido nucleico; al tercero la forma <strong>de</strong> la partícula/forma <strong>de</strong> la nucleocápsida, y al cuarto par los hospedantesinfectados/tipos <strong>de</strong> vectores [Gibbs y Garrison,1968].Estos sistemas estuvieron basados en las propieda<strong>de</strong>sbiológicas <strong>de</strong> los virus, que por entonces era la informaciónmás accesible, y <strong>de</strong>bido a su poca soli<strong>de</strong>z fueronpoco a poco no consi<strong>de</strong>rados. Más tar<strong>de</strong>, durante la segundamitad <strong>de</strong>l siglo XX, se produjeron importantesavances en la información relativa a las propieda<strong>de</strong>s físico-químicasy a la composición <strong>de</strong> proteínas y ácidosnucleicos <strong>de</strong> los virus, lo que permitió compren<strong>de</strong>r mejorla naturaleza <strong>de</strong> estos patógenos.Finalmente, en el Congreso <strong>de</strong> Microbiología, celebradoen Moscú en 1966, se creó el Comité Internacional <strong>de</strong>Taxonomía <strong>de</strong> Virus (International Committee onTaxonomy of Viruses (ICTV)), con la tarea <strong>de</strong> <strong>de</strong>sarrollarun esquema taxonómico simple y universal paratodos los virus. De esta forma, <strong>de</strong>s<strong>de</strong> 1971 el ICTV, aloperar basado en la comunidad mundial <strong>de</strong> virólogos,12/fitosanidadGonzález Ariasha elaborado ocho informes. El octavo [Fauquet et al.,2005] se estructuró en función <strong>de</strong> sus pre<strong>de</strong>cesores, yregistra las actas <strong>de</strong>l comité <strong>de</strong>s<strong>de</strong> el 2000, e incluye las<strong>de</strong>cisiones tomadas en el XI y XII Congresos Internacionales<strong>de</strong> Virología, y <strong>de</strong> los encuentros intermedios<strong>de</strong>l ICTV en el 2001, 2002 y 2003. En general se establecióque el nivel jerárquico <strong>de</strong> especie sería <strong>de</strong>finido yadicionado a las categorías <strong>de</strong> género, subfamilia, familiay or<strong>de</strong>n. De esta forma se <strong>de</strong>finieron 743 especies <strong>de</strong>virus, 278 especies tentativas en un género, 87 especiesno asignadas a un género y 16 virus no asignados [DelValle di Feo, 2006]. En cuanto a los viroi<strong>de</strong>s, consi<strong>de</strong>radosagentes subvirales, el ICTV <strong>de</strong>finió la existencia <strong>de</strong>una estructura taxonómica formada por dos familias:Pospiviroidae y Avsunvirodae. En la primera se incluyencuatro géneros, con 23 especies y dos especies tentativas,mientras que en la segunda se <strong>de</strong>signaron dosgéneros, uno no asignado, dos especies y seis no asignadasen un género.Los fitoplasmas fueron reconocidos como asociados alos micoplasmas, y se incluyeron <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> la claseMollicutes [Cole et al., 1973]. Más tar<strong>de</strong> se estableció laclasificación <strong>de</strong> 12 candidatos a fitoplasmas <strong>de</strong> acuerdocon las secuencias nucleotídicas <strong>de</strong> los genes que codificanpara la región 16S ribosomal, los que están agrupadosen cuatro ór<strong>de</strong>nes y dos géneros [Gun<strong>de</strong>rsen et al.,1994].Desarrollo <strong>de</strong> las técnicas <strong>de</strong> diagnósticopara virus, viroi<strong>de</strong>s y fitoplasmas en CubaEl avance <strong>de</strong> las técnicas <strong>de</strong> diagnóstico <strong>de</strong> los patógenosya mencionados está asociado al <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> lavirología vegetal, proceso que comenzó años atrás conla creación paulatina <strong>de</strong> nuevas instituciones científicasy con la asesoría extranjera, entre ellas la rusa y lafrancesa, que encauzaron <strong>de</strong> forma <strong>de</strong>finitiva los logrosactuales. En la etapa comprendida <strong>de</strong> 1960 a 1964 solose contaba con pocos especialistas en esta rama, que enreducidos locales y con el conocimiento básico <strong>de</strong> nodiagnosticar una virosis, solo mediante la manifestaciónvisual <strong>de</strong> los síntomas, aplicaban la técnica <strong>de</strong> plantasindicadoras, la que se fundamenta en la característica<strong>de</strong> muchos virus <strong>de</strong> ser transmitidos <strong>de</strong> formamecánica y <strong>de</strong> reproducir síntomas específicos en <strong>de</strong>pen<strong>de</strong>ncia<strong>de</strong>l hospedante. En 1968 se fundó el CentroNacional Fitosanitario, y se inició la creación <strong>de</strong> loslaboratorios provinciales <strong>de</strong> sanidad vegetal (Laprosav),que se completaría en 1976 en las provincias <strong>de</strong> Santiago<strong>de</strong> Cuba, Granma, Las Tunas y Guantánamo, y en
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