XLI Congreso Anual de la Asociación Española para el Estudio del Hígado

62 XLI Congreso Anual de la Asociación Española para el Estudio del Hígado
Objetivos: analizar la expresión y función de TLR6 y TLR2 en
mononucleares sanguíneos (PBMC) de obesos mórbidos (OM) y correlacionarlo
con el grado de lesión histológica y su expresión en
tejido hepático.
Métodos: Prospectivamente se analizó en 40 OM sometidos a cirugía
bariátrica la expresión de TLR6 y TLR2 en PBMCs y su función,
tras estimulación con ligandos específicos, mediante citometría de
flujo. Se obtuvo una biopsia hepática en la que se determinó la
presencia y gravedad de EHDG. La expresión de TLR6 y TLR2 en
tejido hepático se determinó con inmunohistoquímica.
Resultados: La expresión de TLR6 es significativamente mayor
en PBMC de sujetos con esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) comparada
con esteatosis simple (ES). Estas diferencias no se observan
en el caso de TLR2. Sin embargo, la funcionalidad de TLR2 y TLR6
está aumentada significativamente al analizar la producción de citoquinas
proinflamatorias dependiente de su estímulo específico
en los pacientes que presentan inflamación lobulillar (fig.). Existe
a su vez una mayor expresión de TLR6 a nivel hepatocitario en los
sujetos que presentan EHDG comparados con aquellos que tienen
una histología normal (fig.). Estas diferencias en tejido hepático no
se encuentran con TLR2.
Conclusiones: TLR6 puede jugar un papel importante en el desarrollo
de EHDG en OM, explicando la asociación existente entre
disbiosis y enfermedad. Además, estos resultados sugieren que
TLR6 pudiera comportarse como un marcador periférico específico
de EHNA en OM.
P-69. LA HIPOXIA CONTRIBUYE A LA ESTEATOHEPATITIS
NO ALCOHÓLICA MEDIANTE LA INDUCCIÓN DE LA ÁCIDO
GRASO TRANSLOCASA CD36 Y LA ACTIVACIÓN DE LA
APOPTOSIS EN LOS HEPATOCITOS: EVIDENCIAS IN VIVO
E IN VITRO
A. González Rodríguez, G. Mateo, I. Soro-Arnáiz,
M. Torres-Capelli, A. Elorza, J. Aragonés y C. García-Monzón
Unidad de Investigación, Hospital Universitario Santa Cristina,
Instituto de Investigación Sanitaria Princesa, CIBEREHD, Madrid.
Introducción: El hígado graso no alcohólico (HGNA) se puede
manifestar como una simple acumulación de grasa en el hepatocito
(esteatosis simple no alcohólica, ESNA) o como una esteatosis con
inflamación y lesión hepatocelular (esteatohepatitis no alcohólica,
EHNA) con estadios variables de fibrosis que puede evolucionar a
cirrosis y hepatocarcinoma. Por otro lado, desde un punto de vista
epidemiológico, el síndrome de apnea-hipopnea obstructiva del
sueño, un trastorno frecuente caracterizado por episodios recurrentes
de apnea o hipopnea durante el sueño acompañados de hipoxia
intermitente, se asocia significativamente con el HGNA.
Nuestra hipótesis es que la hipoxia puede contribuir a la esteatosis
hepática y al daño hepatocelular induciendo en los hepatocitos la
expresión de transportadores de ácidos grasos y apoptosis.
Objetivos: Determinar si la hipoxia produce ESNA o EHNA in vivo
y evaluar el perfil de expresión del transportador de ácidos grasos
CD36, el contenido lipídico y la presencia de apoptosis en células
de hepatoma humano HepG2 en condiciones de hipoxia y sobrecarga
de ácidos grasos saturados (ácido palmítico, AP) e insaturados
(ácido oleico, AO).
Métodos: Se analizó el tejido hepático de ratones deficientes del
gen Vhl (VhlKO), un modelo genético de hipoxia que se caracteriza
por una marcada sobreexpresión intracelular de los factores inducibles
por hipoxia (HIF) 1 y 2, mediante hematoxilina-eosina, tricrómico
de Masson, inmunohistoquímica (IHQ) y western blot (WB).
Además, se determinó el perfil de expresión de CD36 (citometría
de flujo, CF), el contenido lipídico (CF) y el nivel de apoptosis en
células HepG2 incubadas durante 24 y 48 horas con diferentes concentraciones
de AO o AP en condiciones de normoxia (21% O2) e
hipoxia (1% O2).
Resultados: Los ratones VhlKO presentaban signos histológicos
de EHNA pero sin fibrosis mientras que los ratones controles (CT)
tenían hígados histológicamente normales. Los hígados de los ratones
VhlKO tenían grandes cantidades de HIF-1 y HIF-2 por WB mientras
que estos factores no se detectaron en el hígado de los ratones
CT. Mediante IHQ, observamos que CD36 se expresaba intensamente
en la mayoría de los hepatocitos de los ratones VhlKO a diferencia
de los ratones CT donde la expresión hepática de CD36 fue mínima.
En las células HepG2 incubadas con dosis crecientes de AO o
AP, el contenido lipídico y la expresión de CD36 aumentaba de manera
dosis y tiempo-dependiente en condiciones de hipoxia y normoxia,
pero era significativamente mayor (2,5 veces y 3 veces a las
48 horas, respectivamente, p < 0,05) en condiciones de hipoxia que
de normoxia. Las células HepG2 incubadas con AP presentaban
apoptosis (detección de caspasa 3 activa por WB) sólo en condiciones
de hipoxia.
Conclusiones: La hipoxia contribuye a la patogenia de la EHNA
debido, al menos en parte, a que induce la expresión del transportador
de ácidos grasos CD36 y activa la apoptosis en los hepatocitos
sometidos a sobrecarga lipídica.
P-70. NUEVOS MICRORNAS PARA LA PREDICCIÓN
NO INVASIVA DE ESTEATOSIS, INFLAMACIÓN Y FIBROSIS
EN LA ENFERMEDAD DEL HÍGADO GRASO NO ALCOHÓLICO
(EHGNA)
M. López-Riera a , E. Sáez b , I. Conde c , Blázquez b , S. Benlloch c ,
M. Prieto c , R. Jover e y A. Zaragoza c
a
Unidad de Hepatología Experimental, IIS Hospital La Fe,
Valencia. b Servicio de Medicina Digestiva, Hospital La Fe,
Valencia. c Servicio de Medicina Digestiva, Sección de Hepatología,
Hospital La Fe, Valencia. e Unidad de Hepatología Experimental,
IIS Hospital La Fe, CIBERehd, Departamento de Bioquímica y
Biología Molecular, Universidad de Valencia.
Introducción: La prevalencia alta y creciente de la EHGNA y la
necesidad de una alternativa diagnóstica no invasiva a la biopsia
hepática lleva actualmente al estudio de biomarcadores de inflamación
y fibrosis serológicos. En los últimos años se ha puesto de
manifiesto la utilidad de los microRNAs circulantes como herramientas
predictivas capaces de discriminar entre estadios de la
enfermedad. El miR-122 circulante se ha propuesto como biomarcador
de EHNA, aunque no correlaciona con el grado de fibrosis.
Además, su aumento en diversas hepatopatías lo convierte en un
marcador general inespecífico de daño hepático.
Objetivos: Realizar un análisis miRNómico de sueros de pacientes
con EHGNA con el fin de identificar nuevos miRNAs circulantes
que muestren diferencias entre pacientes con distinto grado de
esteatosis, inflamación, y fibrosis.
Métodos: Estudio observacional analítico (de cohortes) y prospectivo,
que incluye 45 pacientes con EHGNA y biopsia hepática
compatible. También se reclutaron en el estudio 10 pacientes “control”
sometidos a cirugía por colelitiasis pero sin EHGNA (aspecto
macroscópico, analítica y ecografía universal. Los distintos miRNAs
se valoraron por real-time Q-PCR utilizando un primer especifico,
un primer universal y una sonda TaqMan. La normalización de los
niveles en cada paciente se hizo con la media geométrica de los
miR-25 y miR-Let7a. Se determinó la concentración sérica de miR-
21 (5p y 3p), miR-22 (5p y 3p), miR-27a (5p y 3p), miR-24-2-5p,
miR-29a-3p, miR-663a, miR-1260a, miR-126-3p, miR-15a-5p y miR-
122. El análisis estadístico se realizó usando el software SSPSv22.
Resultados: La histología se evaluó según la escala Brunt modificada
(NASH CRN) y estadio de fibrosis. Un 19% de pacientes se