dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola

More documents

Recommendations

Info

homogén, in vitro jól karakterizált sejtcsoport sorsát tanulmányozhattuk agyi környezetben, többféle módszerrel módosított körülmények között. A laboratóriumunkban kifejlesztett és az ATCC törzsgyűjteménybe bekerült NE-4C idegi őssejtvonal (CRL-2925, 2926) p53-deficiens, 9 napos egérembrió előagyhólyagjából származó, neuroektodermális sejtvonal (8/A ábra). A NE-4C PLAP-4C GFP-4C 8. ábra A: Az NE-4C idegi őssejtvonal sejtjei tenyészetben. Fáziskontraszt mikroszkópos kép. B: Az NE-4C sejtvonal placentáris hőrezisztens alkalikus foszfatázt expresszáló alklónjának (PLAP-4C) sejtjei tenyészetben. Fénymikroszkópos kép. C: Az NE-4C sejtvonal zöld fluoreszcens fehérjét expresszáló alklónjának (GFP-4C) sejtjei tenyészetben. Fluoreszcens mikroszkópia. Mérce: 20 m. Egy sejt-eredetű klón, azaz sejtjei geno- és fenotípusosan azonosak. Munkatársaink a sejtvonal részletes jellemzését elvégezték (Schlett és Madarász 1997, Schlett és mtsai 1997, Herberth és mtsai 2002, Jelitai és mtsai 2002, Tárnok és mtsai 2002, Környei és mtsai 2005, Varga és mtsai 2008), tanulmányaik alapján elmondható, hogy az NE-4C sejtek sejtkultúrában, megfelelő körülmények között korlátlanul proliferálnak, önmegújító képességgel bírnak. Retinsavas kezelés vagy asztroglia sejtekkel való együtt-tenyésztés eredményeképpen elköteleződésük reprodukálható módon megindul az idegsejt és asztroglia fenotípus irányába (9. ábra). Indukálatlan őssejtek 10 -6 -10 -8 M RA Sokszorozó progenitorok Apoptózis Aggregáció B Idegi prekurzorok Kivándorlás 9. ábra Az NE-4C sejtvonal differenciálódási rendje in vitro retinsavas indukciót követően. RA: (all-transz) retinsav. 30 C Érő idegsejtek Érő asztrogliasejtek Aljzatsejtek, progenitorok 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Indukciós napok
Az idegi differenciálódás folyamatainak in vitro tanulmányozása mellett munkatársaink az NE-4C őssejtvonalból markergénnel jelölt al-vonalakat hoztak létre, hogy a sejteket in vivo modellkísérletek során az agyszöveten belül is követni tudjuk (Demeter és mtsai 2004). A zöld fluoreszcens fehérjét (GFP) és placentáris hőrezisztens alkalikus foszfatázt (PLAP) expresszáló alklónok (8/B, 8/C, 10. ábra) az eredeti sejtvonal tuljadonságait megtartották. A RA0-2, fix. 6 10. ábra A GFP-4C sejtek differenciálódása retinsav hatására. A: A GFP-4C sejtek 48 órás retinsavas (RA) indukciót (0-2. nap) követően III-tubulin pozitív idegsejteket képeznek tenyészetben az indukció kezdetétől számított 6. napra (fix. 6: fixálás a 6. napon). Zöld: GFPfluoreszcencia, vörös: III-tubulin immunreaktivitás. B: A GFP-4C sejtek 48 órás retinsavas indukciót (0-2. nap) követően GFAP-pozitív asztrocitákat képeznek tenyészetben az indukció kezdetétől számított 12. napra. Kék: Hoechst magfestés, vörös: GFAP immunreaktivitás. Fluoreszcens mikroszkópos képek. Mérce: 20 m. Implantációs vizsgálatok az NE-4C őssejtekkel GFP / III-tubulin B Hoechst / GFAP Kollégáink az NE-4C jelölt alklónjaival implantációs kísérleteket végeztek különböző életkorú befogadó állatokon. A sejtsorsot illetően jelentős különbségeket tapasztaltak, amikor a GFP-4C/PLAP-4C sejteket embrionális, újszülött, illetve felnőtt befogadó állatokba ültették be. A jelölt idegi őssejtek korai embrionális csirke előagyhólyagjába implantálva („csirke-egér kiméra”) hetekig túléltek, kisebb sejtaggregátumot képeztek a befogadó szövetben és ezt elhagyva az agyi parenchymában vándorolni tudtak. Az aggregátumon belül és azon kívül is idegsejteket képeztek. Több idegsejt képződött a befogadó agyszövethez közelebbi graft területeken, ami jelezheti a befogadó szövet diffúzibilis faktorainak fontos szerepét a beültetett sejtek elköteleződésében. A technikailag jóval nehezebb embrionális egéragyba történő implantáció során a sikeresen elvégezhető műtét és fixálás időpontja között a kifejlett idegsejtek 31 RA0-2, fix. 12
Page 1 and 2: A környezet hatása embrionális n
Page 3 and 4: Eredmények .......................
Page 5 and 6: NG-2 - oligodendroglia prekurzor se
Page 7 and 8: technikájával bizonyították az
Page 9 and 10: 2. ábra Az őssejtek leszármazás
Page 11 and 12: 3. ábra A neuroepitheliális ősse
Page 13 and 14: A károsodás típusa Faj Detektál
Page 15 and 16: Céljukhoz, a szaglógumóhoz eljut
Page 17 and 18: A neurogén környezet jellemzői A
Page 19 and 20: sejtproliferáció-fokozódás mell
Page 21 and 22: agyi környezet módosítására, a
Page 23 and 24: A központi idegrendszeri kórálla
Page 25 and 26: módosításra, vagyis immortalizá
Page 27 and 28: Sejtimplantációt érintő problé
Page 29: mennyiségben voltak megtalálható
Page 33 and 34: Célkitűzések Munkám során azt
Page 35 and 36: kimetszettük. A kiemelt szövetet
Page 37 and 38: 11. ábra Primer egér asztrociták
Page 39 and 40: párhuzamos mérésből nyert adato
Page 41 and 42: B. Állatkísérletek Az állatkís
Page 43 and 44: sejtimplantációban nem részesül
Page 45 and 46: A kapott pontszámot minden csoport
Page 47 and 48: (6. táblázat). Amennyiben a máso
Page 49 and 50: Eredmények I. NE-4C sejtek „sors
Page 51 and 52: Ép állatokban - a korábbi kísé
Page 53 and 54: Hosszabb túlélés (5-8 hét) sor
Page 55 and 56: A 20. ábra A: A GFP-RC sejtklón t
Page 57 and 58: I.2 Az NE-4C sejtek kölcsönhatás
Page 59 and 60: fel az eltérő sejtek kezelésére
Page 61 and 62: I.2.3 A GL261 tumorsejtek és az NE
Page 63 and 64: Nem volt jele annak, hogy a tumorse
Page 65 and 66: II. In vitro előindukált GFP-4C s
Page 67 and 68: 12. táblázat Előindukált GFP-4C
Page 69 and 70: (34/ B ábra). Tehát a retinsavval
Page 71 and 72: A Nox Hipox HIF-1 34. ábra 48 ór
Page 73 and 74: TUNEL-pozitív sejtek aránya [%] A
Page 75 and 76: A Hoechst / III-tubulin B Normoxia
Page 77 and 78: expressziója a vizsgált időszakb
Page 79 and 80: III.2.1 Az implantált állatok vis
Page 81 and 82:
(40/ A ábra). A lézionált terül
Page 83 and 84:
A kisebb repopuláló saját- és b
Page 85 and 86:
A Hoechst A’ ctx ctx B B’ C ctx
Page 87 and 88:
Megbeszélés Teoretikusan a széle
Page 89 and 90:
16. táblázat Rövidítések: rev.
Page 91 and 92:
eakcióját vizsgáltuk. A hideglé
Page 93 and 94:
idegsejt-prekurzorok valószínűle
Page 95 and 96:
tumortól távolabbra (500-1000 m)
Page 97 and 98:
következtében szórványosan megf
Page 99 and 100:
Következtetések Munkánk során v
Page 101 and 102:
Összefoglalás Az NE-4C neuroektod
Page 103 and 104:
Irodalomjegyzék Aboody KS, Brown A
Page 105 and 106:
experimental brain tumors using neu
Page 107 and 108:
Curtis, M. A., Penney, E. B., Pears
Page 109 and 110:
Freundlieb N, François C, Tandé D
Page 111 and 112:
Hicks AU, Lappalainen RS, Narkilaht
Page 113 and 114:
Ke Y, Chi L, Xu R, Luo C, Gozal D,
Page 115 and 116:
Lim DA, Tramontin AD, Trevejo JM, H
Page 117 and 118:
Merkle FT, Tramontin AD, García-Ve
Page 119 and 120:
Pistollato F, Chen HL, Schwartz PH,
Page 121 and 122:
Schäbitz WR, Schade H, Heiland S,
Page 123 and 124:
injury in adult rats and its associ
Page 125 and 126:
Weinzierl MR, Laurer HL, Fuchs M, W
Page 127:
Köszönetnyilvánítás Köszönet
show all

dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?