dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola

III. Változó oxigén-ellátottság hatásai az NE-4C sejtekre
Mivel az indukálatlan vagy in vitro előindukált GFP-4C idegi őssejtek beültetésével
nem értünk el szöveti integrációt, a befogadó környezetet próbáltuk olyan irányba
befolyásolni, hogy az kedvező hatást gyakoroljon a beültetett őssejtekre.
Az oxigéntenzió változása alapjaiban befolyásolja a sejtek túlélését, szaporodását és
elköteleződési folyamatait is. Vizsgálataimban a környezet oxigén tenziójának
változtatásaival próbáltam befolyásolni -in vitro és in vivo- az idegi őssejtek sorsát.
III.1 Az NE-4C őssejtek „viselkedése” hipoxiás környezetben
In vitro modellkísérleteket folytattam hipoxiás kamra segítségével. A hipoxiás
kamrába 1% O2, 5% CO2, 94% N2-t tartalmazó gázkeveréket juttattam. A kamrában, az
alacsony (1% tf) oxigénkoncentrációtól eltekintve, a GFP-4C sejtek az előzőekben már
bemutatott feltételek mellett nőttek.
Az őssejteket indukálatlan állapotban és a retinsavas indukció különböző stádiumaiban
(proliferáló progenitorok, idegi prekurzorok, fejlődő neuronok időszakai) helyeztem a
hipoxiás kamrába 6, 12, vagy 48 órára.
A tenyészetek kiültetésének napját 0. napként jelöltem. A retinsavas kezelést (mindig a
0.-2. napig tartott) RA0-2-vel jelöltem. A tenyészetek hipoxiás kezelésének
idejét/időtartamát H-val jelöltem, és a 0. naphoz viszonyítva adtam meg (pl. H6, H6-8).
A tenyészetek fixálásának idejét szintén a 0. naphoz viszonyítva adtam meg (pl. fix. 6).
A különböző differenciációs állapotban különböző időtartamú hipoxiás kezelésen átesett
tenyészetek életképességét, sejtproliferációját, apoptózis-arányát, neuronképzését és
génexpressziós változásait a normoxiás környezetben tartott kontroll tenyészetekéhez
hasonlítottam. Megvizsgáltam a tenyészetekben a HIF-1 jelenlétét is.
48 órás hipoxiás kezelést követően mind az indukálatlan, mind az indukált
tenyészetekben jelentősen fokozódott a HIF-1 immunpozitivitás a normoxiás
kontrollhoz képest (35. ábra). A HIF-1 -változás tehát alkalmas volt arra, hogy a
hipoxiás kezelés „megtörténtét” jelezze.
70