dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola
dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola
dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
II. In vitro előindukált GFP-4C sejtek „sorsa” intakt és sértett agyi környezetben<br />
Mivel adataink bizonyították, hogy a GFP-4C sejtek a felnőtt agyi környezetben igen<br />
kevéssé, vagy egyáltalán nem fejlődnek idegsejtekké, felvetődött a kérdés, hogy milyen<br />
idegi sejtfejlődési állapot teheti alkalmassá az NE-4C sejteket az intracerebralis túlélésre<br />
és integrációra.<br />
A GFP-4C sejteket két - laborunkban kidolgozott - módszerrel késztettem in vitro idegi<br />
fejlődésre. A GFP-4C tenyészeteken 48 órás retinsavas indukciót végeztem, az eképpen<br />
indukált sejteket RA-GFP-4C-nek neveztem. A másik indukciós módszer abból állt,<br />
hogy a GFP-4C sejteket perinatális (P0-P2) egér asztrocitákkal együtt tenyésztettem<br />
(„nem-kontakt ko-kultúra”, 11. ábra). Utóbbi sejteket AG-GFP-4C-ként jelöltem.<br />
Kontroll lemezeken végzett immuncitokémiai vizsgálat segítségével megállapítottam,<br />
hogy a sejtek elköteleződése megindult a kezelés hatására.<br />
A kétfajta indukció kezdetétől számított 4. napon a sejteket tenyésztőedényükből<br />
szuszpenzióba vettem fel. Az előindukált őssejteket felnőtt, előzetesen nem kezelt CD1-<br />
egerek (n=12) kamraközeli striatalis/oldalkamrai régióiba (Br -0,1, L 1,2, V 2,0)<br />
juttattam be (5x10 4 sejt/állat). Egy és három hetes túlélést követően értékeltem a sejtek<br />
sorsát a befogadó agyak hisztológiai - immuncitokémiai vizsgálataival (GFAP, NeuN,<br />
III-tubulin-festés).<br />
A beültetett retinsavval indukált GFP-4C sejtek túlélése az agyban igen csekély mértékű<br />
volt; a vizsgálat állatok csupán 33%-ában találtunk élő, zölden fluoreszkáló RA-GFP-<br />
4C sejtet 1 hetes túlélés, 0%-ában 3 hetes túlélés esetén. Az asztroglia ko-kultúrában<br />
indukált GFP-4C sejtek 1 és 3 hetes túlélés után minden állatban megtalálhatók voltak<br />
(11. táblázat).<br />
11. táblázat Az előindukált GFP-4C sejtek túlélése a befogadó állatok agyában<br />
Élő beültetett sejteket hordozó állatok százalékos aránya<br />
Túlélési idő RA-GFP-4C AG-GFP-4C<br />
D7 33% (3/1)* 100% (3/3)<br />
D21 0% (3/0) 100% (3/3)<br />
* zárójelben: összes kezelt állat/élő beültetett sejtet hordozó állat az adott napon<br />
A sejteket az oldalkamra környéki striatalis régióban, az oldalkamrákban, a<br />
hippocampus közvetlen környezetében, illetve a corpus callosum rostkötegei mentén<br />
65
Change language