dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola
dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola
dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
A<br />
Nox<br />
Hipox<br />
HIF-1<br />
34. ábra 48 órás hipoxiás kezelés (Hipox) hatására a GFP-4C sejttenyészetekben a normoxiás (Nox)<br />
kontrollhoz képest fokozott HIF-1 immunpozitivitás jelent meg. A, B: Indukálatlan vagy a retinsavasan<br />
indukált normoxiás tenyészetek HIF-1 festődése (kontroll). C, D: Parallel hipoxiás tenyészetek HIF-<br />
festődése. Fluoreszcens mikroszkópos képek. HIF-1 immunpozitivitás: vörös. Mérce: 40 m. A képeken<br />
a retinsavas kezelés (RA), hipoxia (H) és fixálás (fix.) időpontja/időtartama napokban van feltüntetve.<br />
A sejtek életképességét AlamarBlue oxidoredukciós vizsgálat segítségével határoztam<br />
meg. Míg a különböző indukciós fázisban 6-12 órás hipoxiával kezelt tenyészetek<br />
életképessége a normoxiás eredményektől szignifikánsan nem tért el, a 48 órás hipoxiás<br />
kezelés jelentékeny változásokat okozott az elköteleződő tenyészetek esetében. A korai<br />
indukciós fázis (0-2. nap) sejtjeinek életképessége szignifikánsan megnőtt, míg az idegi<br />
fejlődésben „elkötelezettebb” (2-4. nap, 4-6. nap, 6-8. nap) sejtek életképessége<br />
szignifikánsan lecsökkent a hipoxiás kezelés hatására (36/ A ábra). A nem indukált<br />
őssejtek viabilitására ezzel ellentétben a hipoxia nem gyakorolt hatást.<br />
RA<br />
C D<br />
RA , H0-2<br />
A sejtproliferációban bekövetkező változásokat [ 3 H]-timidin beépülés mérésével<br />
vizsgáltam 48 órás hipoxiát követően. A beépített radioaktív timidin fehérjetartalomra<br />
normalizált [DPM/fehérje] értékei azt mutatták, hogy az indukálatlan őssejtek és az<br />
indukció korai stádiumaiban lévő tenyészetek (2. nap, 4. nap) hipoxiás és normoxiás<br />
körülmények között azonos mértékű sejtproliferációt mutatnak. Az idegi fejlődésben<br />
„elkötelezettebb” sejteket tartalmazó tenyészetekben (6. nap, 8. nap) azonban a hipoxia<br />
a proliferációs rátát szignifikánsan csökkentette a normoxiás társtenyészetekhez képest<br />
(36/ B ábra). A neuronális fejlődés retinsavas indukciója során a sejtproliferáció az<br />
idegsejt-érés előrehaladtával normoxiás körülmények mellett is csökken. A hipoxia a<br />
71<br />
B<br />
RA 0-2 fix. 6<br />
RA 0-2, H 4-6, fix. 6
Change language