dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola

More documents

Recommendations

Info

hipoxia csökkentette a neuronszámot a normoxiás kontrollhoz képest. Ennek hátterében a proneurális és neurális gének expressziójának hipoxia okozta csökkenését is bizonyítottuk. A hipoxia, tehát, az in vitro idegsejt-fejlődést gátolja és a differenciálatlan ős/progenitor-sejtállapot fennmaradásának kedvez. III.2 Az NE-4C őssejtek intracerebralis „sorsa” magas in vivo oxigén tenzió mellett Miután az in vitro adatok megmutatták, hogy az alacsony oxigén tenzió az idegi őssejtek idegsejt irányú differenciálódását gátolja, a felnőtt egéragyba beültetett őssejtek szöveti integrációját az oxigén tenzió növelésével kívántam segíteni. Ennek kivitelezését hiperbárikus oxigénterápia alkalmazásával oldottuk meg. A kísérletekhez szükséges berendezést és szakmai segítséget Dr. Gőbl Anna és munkatársai biztosították a budapesti Baromedical Hiperbár Centrumban. A kísérletekbe bevont, felnőtt, NMRI egereket a táblázatban feltüntetett kísérleti csoportokba osztottuk (13. táblázat). 13. táblázat A kísérletek során felhasznált állatok száma és kísérleti csoportjaik 78 Kísérleti állatok száma Műtéti beavatkozás Normoxia HBO Fagyasztásos agykérgi lézió 14 15 Sejtbeültetés 31* 6 Lézió+beültetés 8 16 *ebben a csoportban felhasználtam a korábbi normoxiás körülmények között végzett sejtbeültetési eredmények adatait Az agykérgi fagyasztásos léziót és sejtimplantációt a korábbi kísérletekkel megegyező módon végeztük. (A lézió koordinátái: Br -0.7 mm, L 2.3 mm, az implantáció helye: Br -0.1 mm, L 3.2 mm, V 1.4 mm) A fagyasztásos lézió napját 0. napként jelöltem (D0). Az állatokat a sejtimplantáció (D7) után 7 alkalommal (D7-D13) napi 90 perces hiperbár oxigén terápiában (2.5 ATA, közel 100% O2) részesítettem.
III.2.1 Az implantált állatok viselkedésvizsgálata Az agykérgi sérülés és sejtbeültetés után a beavatkozásokat követő 1-4-7-14-30-60. napokon megvizsgáltuk, hogy jelentkeznek-e változások az állatok viselkedésében. Mivel a lézió és a beültetés minden esetben csak a jobb oldali agykérget érintette, elsősorban azt vizsgáltuk, hogy a jobb és bal oldali izomerőben és mozgáskoordinációban mutatkozik-e eltérés. A bilaterális aszimmetria-vizsgálat („sticky tape” teszt) során az állatok jobb vagy bal hátsó végtagjára ragadt tapasz eltávolításának idejét mértük. A mellső végtagi aszimmetria teszt során az állatokat átlátszó hengerbe helyeztük, és a henger falára való felkapaszkodás közben figyeltük mozgásukat. A „tight rope” teszt során pedig az állatokat mellső végtagjaikkal egy kötélre helyeztük és kötélre való sikeres felkapaszkodásukat, az oldalsó felfüggesztéshez történő kimászásukat (vagy kötélről való leesésüket) értékeltük. Az agykérgi fagyasztásos sértés csak átmeneti neurológiai eltéréseket eredményezett a kísérleti állatokban. A sérült egerek a bilaterális aszimmetria teszt során szignifikánsan, a mellső végtagi aszimmetria teszt és „tight rope” teszt során tendenciájában rosszabb teljesítményt értek el a kontroll állatokhoz képest az első, léziót követő napon. A különbségek 3 napon belül teljesen megszűntek. Az implantált állatok hiperbárikus oxigénkezelését követően szignifikánsan jobb teljesítményt nyújtottak a bilaterális aszimmetria tesztben az 5. és 14. sejtbeültetés utáni vizsgálati napon (107±48 sec, 64±29 sec) a beültetésben részesült, de HBO-val nem kezelt kontrollhoz képest (194±55 sec, 189±63 sec). A későbbi időpontokban (a 23. és 53. posztimplantációs napon, vagyis 17 és 47 nappal HBO-kezelés befejezését követően) végzett viselkedéstesztek szignifikáns eltérést nem tártak fel a kísérleti csoportok között. A sértett agykérgű, sejtbeültetésben nem részesült állatok HBO-val kezelt és nem kezelt csoportjai között eltérést nem találtunk. Az eltérések értékeléséhez egy- és többszempontos, valamint ismételt méréses variancia-analízist és poszt-hoc tesztet használtunk. III.2.2 A különböző kezeléseken átesett állatok agyának hisztológiai vizsgálata 2 hetes, 1 és 2 hónapos túlélést követően vizsgáltam meg a GFP-4C sejtek túlélését, vándorlását, differenciálódását a módosított agyi környezetben hisztológiai, immuncitokémiai módszerekkel tanulmányoztam. 79
Page 1 and 2:
A környezet hatása embrionális n
Page 3 and 4:
Eredmények .......................
Page 5 and 6:
NG-2 - oligodendroglia prekurzor se
Page 7 and 8:
technikájával bizonyították az
Page 9 and 10:
2. ábra Az őssejtek leszármazás
Page 11 and 12:
3. ábra A neuroepitheliális ősse
Page 13 and 14:
A károsodás típusa Faj Detektál
Page 15 and 16:
Céljukhoz, a szaglógumóhoz eljut
Page 17 and 18:
A neurogén környezet jellemzői A
Page 19 and 20:
sejtproliferáció-fokozódás mell
Page 21 and 22:
agyi környezet módosítására, a
Page 23 and 24:
A központi idegrendszeri kórálla
Page 25 and 26:
módosításra, vagyis immortalizá
Page 27 and 28: Sejtimplantációt érintő problé
Page 29 and 30: mennyiségben voltak megtalálható
Page 31 and 32: Az idegi differenciálódás folyam
Page 33 and 34: Célkitűzések Munkám során azt
Page 35 and 36: kimetszettük. A kiemelt szövetet
Page 37 and 38: 11. ábra Primer egér asztrociták
Page 39 and 40: párhuzamos mérésből nyert adato
Page 41 and 42: B. Állatkísérletek Az állatkís
Page 43 and 44: sejtimplantációban nem részesül
Page 45 and 46: A kapott pontszámot minden csoport
Page 47 and 48: (6. táblázat). Amennyiben a máso
Page 49 and 50: Eredmények I. NE-4C sejtek „sors
Page 51 and 52: Ép állatokban - a korábbi kísé
Page 53 and 54: Hosszabb túlélés (5-8 hét) sor
Page 55 and 56: A 20. ábra A: A GFP-RC sejtklón t
Page 57 and 58: I.2 Az NE-4C sejtek kölcsönhatás
Page 59 and 60: fel az eltérő sejtek kezelésére
Page 61 and 62: I.2.3 A GL261 tumorsejtek és az NE
Page 63 and 64: Nem volt jele annak, hogy a tumorse
Page 65 and 66: II. In vitro előindukált GFP-4C s
Page 67 and 68: 12. táblázat Előindukált GFP-4C
Page 69 and 70: (34/ B ábra). Tehát a retinsavval
Page 71 and 72: A Nox Hipox HIF-1 34. ábra 48 ór
Page 73 and 74: TUNEL-pozitív sejtek aránya [%] A
Page 75 and 76: A Hoechst / III-tubulin B Normoxia
Page 77: expressziója a vizsgált időszakb
Page 81 and 82: (40/ A ábra). A lézionált terül
Page 83 and 84: A kisebb repopuláló saját- és b
Page 85 and 86: A Hoechst A’ ctx ctx B B’ C ctx
Page 87 and 88: Megbeszélés Teoretikusan a széle
Page 89 and 90: 16. táblázat Rövidítések: rev.
Page 91 and 92: eakcióját vizsgáltuk. A hideglé
Page 93 and 94: idegsejt-prekurzorok valószínűle
Page 95 and 96: tumortól távolabbra (500-1000 m)
Page 97 and 98: következtében szórványosan megf
Page 99 and 100: Következtetések Munkánk során v
Page 101 and 102: Összefoglalás Az NE-4C neuroektod
Page 103 and 104: Irodalomjegyzék Aboody KS, Brown A
Page 105 and 106: experimental brain tumors using neu
Page 107 and 108: Curtis, M. A., Penney, E. B., Pears
Page 109 and 110: Freundlieb N, François C, Tandé D
Page 111 and 112: Hicks AU, Lappalainen RS, Narkilaht
Page 113 and 114: Ke Y, Chi L, Xu R, Luo C, Gozal D,
Page 115 and 116: Lim DA, Tramontin AD, Trevejo JM, H
Page 117 and 118: Merkle FT, Tramontin AD, García-Ve
Page 119 and 120: Pistollato F, Chen HL, Schwartz PH,
Page 121 and 122: Schäbitz WR, Schade H, Heiland S,
Page 123 and 124: injury in adult rats and its associ
Page 125 and 126: Weinzierl MR, Laurer HL, Fuchs M, W
Page 127: Köszönetnyilvánítás Köszönet
show all

dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?