dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola

11. ábra Primer egér asztrociták és GFP-4C idegi őssejtek nem kontakt ko-kultúrájának
vázlatos képe.
Az asztoglia-GFP-4C ko-kultúrában a sejtek 4 napig éltek együtt, szérummentes
(DMEM / F12 : 1/1 nutriens médiummal, glutaminnal, gentamycinnel, ITS-sel [inzulin,
transzferrin, szelénium]) dúsított tápoldatban. Az üveglemezeket a kívánt időben
eltávolítottuk a Petri-csészéből, majd az indukált GFP-4C sejteket („AG-GFP-4C”)
implantációra, vagy immuncitokémiai vizsgálatokra használtuk.
A sejtek által termelt szolubilis faktorok vizsgálata
Az NE-4C sejteket, a primer asztrogliasejteket, az LL-glia, a C6-glióma, az U87 glióma
és a GL261 glioblasztóma sejteket 24 óráin át inkubáltuk friss, szérummentes
tápoldatban (definiált médium; Neurobasal-B27; Gibco-BRL Life Technologies) 37 C
hőmérsékleten, 5% CO2 mellett. A sejtek által 24 óran át „kondicionált” médiumot 1:1
arányban friss definiált médiummal kevertük, és más sejtk tenyészeteihez adva
vizsgáltuk a sejtproliferacióra gyakorolt hatását.
A sejtek hipoxiás kezelése
GFP-4C
Indukálatlan, illetve az indukció 0., 2., 4., 6., 8. napján lévő sejttenyészeteket 6, 12 vagy
48 órára hipoxiás kamrába (Billups-Rothenberg, Modular Incubator Chamber)
helyeztük. A kamrát alacsony O2-tartalmú gázkeverékkel (1%O2, 5% CO2, 94% N2)
töltöttük fel. A 96-lyukú tenyésztő tálcákon növesztett hipoxia-kezelt, illetve kontroll
sejttenyészeteken mértük a sejtek életképességét, 24-lyukú tenyésztőedényben
növesztett sejteken elemeztük a sejtösszetétel (immuncitokémiai vizsgálatok) és a
sejtpusztulás változásait (TUNEL-reakció), valamint a sejtproliferációt ([ 3 H]-timidin),
illetve a 60 mm-es Petri-csészében kezelt sejttenyészetekből RNS-t izoláltunk a
génexpressziós változások vizsgálataira.
Primer egér asztrocita
37
GFP-4C