dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola
dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola
dr. Zádori Anita - Semmelweis Egyetem Doktori Iskola
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
kimetszettük. A kiemelt szövetet feldaraboltuk, majd tripszines kezeléssel (0,05% v/v<br />
PBS-ben) disszociáltattuk, a nagyobb szövetdarabokat centrifugálással (800 g, 5-8 perc)<br />
eltávolítottuk, majd a felülúszóban lévő sejtszuszpenziót 10% FCS-MEM<br />
tápfolyadékban 24-es lyukú szövettenyésztő tálcákba ültettük. A neomicin-rezisztens<br />
GFP-4C sejteket geneticin kezeléssel válogattuk ki, majd fluoreszcens mikroszkópiával<br />
azonosítottuk. A “visszatenyésztett” GFP-4C (GFP-RC), és retinsavval előindukált<br />
GFP-4C (RA-GFP-RC) sejteket további vizsgálatokra fenntartottuk.<br />
Primer asztroglia tenyészetek<br />
Asztroglia tenyészeteket újszülött vagy posztnatális 1, 2 napos (P0-P2) vad típusú CD1<br />
és transzgenikus, humán GFAP promóter kontrollja alatt felerősített zöld fluoreszcens<br />
fehérjét (eGFP) expresszáló (hGFAP-eGFP) egerek előagyszövetéből készítettünk<br />
Környei és munkatársai (2005) módszere szerint. A koponyacsontok eltávolítása után<br />
steril körülmények között kiemeltük az agyat. Az agyhártyákat óvatosan eltávolítottuk,<br />
majd az előagy-szövetet feldaraboltuk. A szövetdarabkákat tripszines (0,05% v/v PBS-<br />
ben) emésztést követően 10% fötális borjúsavót (FCS, Gibco, Invitrogen), 4 mM<br />
glutamint (Sigma-Al<strong>dr</strong>ich) és 40 g/ml gentamycint (Chinoin Rt., Sanofi-Aventis)<br />
tartalmazó Minimum Essential Medium (MEM; Sigma-Al<strong>dr</strong>ich) oldatban Pasteur-<br />
pipettával trituráltuk. Az egyedi sejtekre disszociáltatott szuszpenziót poli-L-lizinnel<br />
(Sigma-Al<strong>dr</strong>ich) bevont 90 mm-es átmérőjű Petri-csészékbe ültettük ki 3-5x10 5 sejt/cm 2<br />
sűrűségben. Ko-kultúrás kísérletek előtt az asztrociták mitotikus aktivitását 1 napos 10<br />
M-os citozin-arabinozid kezeléssel gátoltuk.<br />
Glióma- és glioblasztómavonalak<br />
Az őssejt-tumorsejt kölcsönhatásokat vizsgáló munkáinkban felhasználtunk egér<br />
eredetű immortalizált LL-gliasejteket (Dr. Latzkovits László - Kísérletes Sebészeti<br />
Intézet ajándéka), egér eredetű GL261 glioblasztóma sejteket (Ausman és mtsai 1970,<br />
Désaknai és mtsai 2003, Szatmári és mtsai 2006) [Dr. Sáfrány Géza - OSSKI ajándéka],<br />
patkányból eredetű C6-gliómasejteket (ATCC No.: CCL-107) [Benda és mtsai 1968],<br />
illetve U87 humán asztroglióma sejteket (ATCC No.: HTB-14) [Ponten és Macintyre,<br />
1968].<br />
35
Change language