CAPA E LOMBADA - Arca - Fiocruz

4.3.2.5 Estabilidade plasmideal
Sugere-se que a estabilidade plasmideal seja monitorada no BCM e no BCT.
Para o segundo esta deve ser cuidadosamente acompanhada na fase de subcultivo
e na fase de produção, em intervalos determinados, até o final da produção.
A estabilidade plasmideal é definida como a capacidade da célula de manter
seus plasmídeos. Dada a sua particularidade, ela é considerada um dos fatores mais
importantes que determinam a habilidade de uma célula recombinante de expressar
seus genes. Assim sendo, ela pode ser afetada por diversos componentes, tais
como:
a) Velocidade específica de crescimento das células hospedeiras e das
células sem plasmídeo;
b) Características genotípicas da cepa;
c) Características estruturais do plasmídeo;
d) Estresse do meio provocado nas células;
e) Condições ambientais pré-existentes.
Dessa forma, deve-se considerar certa probabilidade (p) de perda do vetor a
cada geração (duplicação celular).
Existem dois tipos básicos de instabilidade dos plasmídeos:
a) Instabilidade de segregação, que é a perda do plasmídeo durante a
divisão celular devida a uma má distribuição dos plasmídeos entre célula
mãe e filha durante a divisão. Técnicas empregadas para evitar este tipo de
instabilidade gênica tem sido o uso de seqüências de partição nos vetores,
além do uso de vetores de alto número de cópias. Paradoxalmente,
plasmídeos de alto número de cópias podem gerar instabilidade na cultura
devido aos efeitos da superexpressão gênica. A melhor forma de evitar
este efeito consiste em utilizarem-se vetores com promotores indutíveis,
concomitantemente com o uso de cultura a alta densidade celular em
batelada alimentada.
b) Instabilidade estrutural, que é a perda causada por mudanças
estruturais do plasmídeo, devido a deleções ou rearranjos do ADN, o que
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