CAPA E LOMBADA - Arca - Fiocruz

4.3.2.13 Características genotípicas e fenotípicas
As características genotípicas e fenotípicas deverão ser verificadas na célula
hospedeira, no BCM e no BCT (restabelecido, na fase de subcultivo, na fase de
produção e no final da batelada).
O genótipo indica o estado genético do ADN em um organismo, enquando que o
fenótipo de uma cepa é um comportamento observado da consituição do genótipo
(New England BioLabs, 2009).
Inúmeros marcadores genotípicos que afetam diretamente características
fenotípicas já foram identificados para E. coli (New England BioLabs, 2009; MMBR,
2009; Promega, 2009).
No entanto, sabe-se que cada cepa de E. coli possui características
genotípicas específicas e devem ser bem estudadas para verificar, caso a caso,
quais seriam os marcadores mais importantes de serem avaliados.
Apresentamos na tabela 4.11 algumas sugestões de marcadores genotípicos de
E. coli consideradas importantes.
Tabela 4.11 Marcadores genotípicos de E. coli
Nome Descrição Efeito da mutação
ara-14
mutação
arabinose
no metabolismo da
bloqueia o catabolismo da arabinose
dam
mutação no ADN
adenina metilase
da enzima bloqueia a metilação de
seqüência 5'...G
resíduos na
m ATC...3'
células portadoras deste plasmídeo
produzem a lisozima T7, um inibidor natural
LysS o plasmídio pLysS se integra no da ARN polimerase T7. Bloqueia a
genoma da célula hospedeira transcrição de seqüências que estão sob o
controle do promotor da T7 ARN polimerase
(Studier, 1991)
galK mutação na galactoquinase bloqueia o catabolismo da galactose
gyrA96 mutação na ADN girase confere resistência ao ácido nalidíxico
lacIq
superprodução
repressor lac
da proteína do
eleva substancialmente os níveis da proteína
do repressor lac, inibindo a transcrição do
promotor lac
Fonte: Promega, 2009
4.3.2.14 Preparação de 3 lotes do Ingrediente Farmacêutico Ativo
Este procedimento é muito importante, pois é necessário para caracterização
do IFA e verificação da reprodutibilidade do processo.
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