CAPA E LOMBADA - Arca - Fiocruz

Estes vetores são construídos normalmente de forma a permitir a clonagem do
ADN estranho, nos locais de restrição cortados no vetor, mas que não afetam a sua
replicação. Se o ADN e o vetor forem cortados com a mesma enzima de restrição,
então a sua junção pode ocorrer por ação da ADN ligase, pela complementariedade
das regiões de cadeia única do ADN chamadas pontas adesivas (Berg et al., 2004;
Lemes, 2007).
c) Incorporação em hospedeiros procarióticos
A molécula de ADN recombinante elaborada in vitro pode ser introduzida num
hospedeiro por transformação da célula ou por infecção da célula com partículas
virais, também estas elaboradas in vitro (Lemes, 2007; Zaha et al., 2003).
A incorporação do ADN no hospedeiro de forma genérica é feita por técnicas:
mecânica - eletroporação, ou química - cloreto de cálcio (Lemes, 2007; Zaha et al.,
2003).
Um passo crucial na tecnologia para produção de moléculas recombinantes é
encontrar o clone pretendido na mistura de clones transformantes (Berg et al., 2004).
d) Detecção e purificação do clone requerido
Procedimentos especiais são necessários para a detecção do gene clonado na
molécula recombinante transformada no hospedeiro. Se o gene é expresso, a
presença de uma proteína estranha na célula poderá ser detectada pela sua
atividade ou por meio de anticorpos específicos, evidenciando assim a presença
deste gene. No entanto, se o gene não é expresso, a sua presença pode ser
detectada utilizando sondas específicas de ácidos nucléicos, que pesquisam uma
cadeia de ADN complementar (Berg et al., 2004; Lemes, 2007).
e) Criação dos Bancos de Células
Após o isolamento e seleção do clone requerido, estas referidas células são
cultivadas em condições e ambientes especiais para formarem o Banco de Células
Mestre (BCM), que é estocado com crioprotetor e congelado sob condições
específicas. Cada BCM origina, após cultivo sob condições pré-definidas, os Bancos
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