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. Medición de la expresión de ARN mensajero de la enzima CYP17 en folículos
ováricos de ratas Control y LA
Luego de lo observado en cuanto a la síntesis de androsterona, se analizó la
expresión de la enzima CYP17, que constituye un punto de regulación importante en la
síntesis folicular de andrógenos. Cabe destacar, que la androsterona no es un producto
inmediato de esta enzima, sino que se produce a partir de uno de sus metabolitos: la
androstenediona que por acción de la enzima 5α-reductasa y 3β-HSD se convertirá en
androsterona.
En el presente experimento se realizó la técnica de RT-PCR semi-cuantitativa
con ARN extraído de folículos ováricos de ambos grupos experimentales, con los
primers y condiciones descriptas en Materiales y Métodos para esta enzima (ver Tabla).
En la Figura 7A se observa la expresión del ARN mensajero de la CYP17 en folículos
ováricos de rata aislados a distintos tiempos luego del tratamiento con el agonista de
GnRH-I, LA. Se observó que el tratamiento con LA produjo una disminución
significativa en la expresión del ARN mensajero de esta enzima a las 8 hs comparado
con los animales Control pertenecientes al mismo tiempo (Figura 7A). Los niveles de
expresión dentro de los grupos no variaron de forma significativa. De manera similar,
Hillier y col. [327] no observaron cambios en la expresión del ARN mensajero de esta
enzima en ratas hipofisectomizadas tratadas con FSH.
Para constatar el efecto inhibitorio de LA sobre la expresión de la CYP17, se
realizó PCR en tiempo real como se describió en Materiales y Métodos. Para ello, se
extrajo ARN total de ovarios de animales que no recibieron gonadotrofinas (0 hs) y de
animales Control y LA sacrificados a las 4 y 8 hs luego de los tratamientos. Como
muestra la Figura 7B, se detectó un aumento significativo en la expresión de la CYP17
a las 4 hs, y una inhibición significativa a las 8 hs del tratamiento con LA comparado
con el grupo Control, de forma coincidente a lo obtenido mediante la técnica semi-
cuantitativa.
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