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activador de proteasas apoptóticas) causando un cambio conformacional y permitiendo
que Apaf-1 interactúe con procaspasa-9 que a su vez activará a las caspasas efectoras 3
y -7. Estos resultados, junto el aumento de la fragmentación apoptótica del ADN
folicular [313;315], nos llevó a estudiar el efecto de LA sobre la actividad de la
principal proteasa efectora de la apoptosis, la caspasa-3.
Los experimentos en los cuales se analizó el clivaje de la caspasa-3 por western
blot, mostraron que el tratamiento con LA aumentó el clivaje de la procaspasa-3,
evidenciado por el aumento del fragmento de la proteína de 17 kDa (p17), fragmento
que corresponde a la proteína activa. Además, se observó un fragmento de 20 kDa (p20)
que constituye un intermediario en el procesamiento de esta enzima. El fragmento de 17
kDa, volvió a los niveles de los animales que solo recibieron gonadotrofinas, luego del
co-tratamiento con Antide. Es interesante destacar, que en el tratamiento solo con
Antide, el procesamiento de la caspasa-3 fue menor que el observado en el grupo
Control. Estos resultados coinciden, tanto con la determinación del clivaje de
Polimerasa Poli-ADP ribosa (PARP), uno de los sustratos de la caspasa-3 durante el
proceso de apoptosis; como con la medición de la actividad de la caspasa-3 mediante el
ensayo colorimétrico. En ambos casos, se observó que LA estimuló el clivaje de PARP
y la actividad de la caspasa-3, siendo revertido el efecto por el co-tratamiento con
Antide. Nuevamente, la administración del Antide, disminuyó el clivaje de PARP y la
actividad de la caspasa-3 comparado al grupo Control. Este resultado, coincide con el
efecto antiapoptótico del Antide en los folículos ováricos, observado anteriormente en
nuestro laboratorio [92]. En esa oportunidad, se describió que los animales tratados con
Antide únicamente, experimentaban un aumento del peso de sus ovarios y del número
de folículos preovulatorios y, una disminución del número de células apoptóticas en
folículos antrales tempranos y preovulatorios comparado al grupo de animales que solo
había sido tratado con gonadotrofina. Además, el Antide inhibió la traslocación de BAX
del citoplasma a la mitocondria y retuvo el citocromo C en la mitocondria comparado al
tratamiento con gonadotrofinas. Estos resultados se corroboran con varios trabajos que
indican la presencia y el rol autocrino o paracrino de péptidos de GnRH en el ovario
[276;357-359]. Nuestras observaciones fueron sumamente importantes, ya que hemos
demostrado que bloqueando el receptor de GnRH-I, existe un efecto estimulador in vivo
del desarrollo folicular; corroborándose nuestra hipótesis acerca de la presencia de un
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