Ocena przydatności oznaczania prohepcydyny w przebiegu ...

odznacza się wysoką powtarzalnością i czułością. Wykorzystano w niej poliklonalne
przeciwciała skierowane przeciwko końcowi N (aminokwasy 28-47) prohepcydyny EG
(2)- HepN, którymi są opłaszczone płaskodenne otworki płytki polistyrenowej,
znajdującej się w zestawie. Próbki roztworów standardowych, kontroli i surowicy
pacjenta nanosi się do odpowiednich otworków płytki. Następnie dodawany jest
roztwór koniugatu, którym jest egzogenna prohepcydyna sprzęŜona z biotyną.
Endogenna prohepcydyna „współzawodniczy” z prohepcydyną zawartą w roztworze
koniugatu o miejsca wiązania z opłaszczonymi przeciwciałami. Po okresie inkubacji
nadmiar nie związanego z przeciwciałami koniugatu jest odpłukiwany i do kaŜdego
otworka dodawany jest kompleks enzymatyczny zawierający peroksydazę chrzanową.
Po kolejnej inkubacji i dokładnym odpłukaniu do kaŜdego otworka dodawany jest
substrat zawierający tetrametylobenzydynę (TMB). Po inkubacji reakcja enzymatyczna
zatrzymywana jest przez dodanie 0,5 M H 2 SO 4 (0,5 molowy roztwór kwasu
siarkowego) . Odczytu wartości OD dokonuje się przy długości fali 450/630 nm zgodnie
z instrukcją producenta (DRG Instruments GmbH, Marburg, Germany). NatęŜenie
powstałej barwy jest odwrotnie proporcjonalne do stęŜenia prohepcydyny w próbce
pacjenta. Czułość metody wynosi < 3,95 ng/ml, zakres odczytu mieści się w granicach 0
– 1000 ng/ml.
9. Standardowe badania wykonywane podczas diagnostyki zakaŜenia (w tym
diagnostyka mikrobiologiczna: posiew krwi, płynu mózgowo-rdzeniowego, posiew
popłuczyn oskrzelowo-pęcherzykowych, posiew moczu, wymaz z nosa, wymaz
z odbytu).
10. Badania specjalistyczne związane ze specyfiką diagnozowanej choroby
noworodka
Analizie poddano:
1. Dane dotyczące ciąŜy, porodu, stanu ogólnego noworodka po urodzeniu, masy
urodzeniowej, płci dzieci (wywiad od rodziców oraz dane z ksiąŜeczki zdrowia
dziecka).
2. Wszystkie parametry czerwonokrwinkowe dostępne podczas wykonywania
standardowej morfologii krwi obwodowej:
a) liczbę krwinek czerwonych (x 10 12 /l),
b) stęŜenie hemoglobiny (g/dl),
59