Materiały - Wydział Technologii Chemicznej - Poznan.pl

WPŁYW FUROSEMIDU W OBECNOŚCI GLUKOZYNA ELEKTROFORETYCZNY OBRAZ ALBUMINYLUDZKIEJ STOSUJĄC DO BARWIENIA BIAŁKACOMASSIE BRILLANT BLUE LUB AgNO 3B. Marczewska 1) , M. Rycyk 2) , R. Kuzioła 1)1)Instytut Inżynierii Środowiska, KUL JPII Lublin, Ofiar Katynia 6a, 37-450 StalowaWola,2)Instytut Biotechnologii, KUL JPII Lublin, Konstantynów 1I, 20-708 LublinDo oznaczania albuminy ludzkiej (HSA) stosowano elektroforezę żelowąnatywną, która umożliwia badanie białek bez ich modyfikacji. Albumina jest białkiemosocza, która w niewielkich ilościach znajduje się w moczu, a jej stężenie jestmarkerem prawidłowego funkcjonowania nerek.Celem pracy było zbadanie wpływu obecności wybranych środkówfarmaceutycznych (furosemid) w obecności glukozy na elektroforetyczny obrazalbuminy osocza ludzkiego przy zastosowaniu różnych technik wybarwiania białka.Badania przeprowadzono w roztworach modelowych imitujących moczo stężeniu 50 mg L -1 albuminy ludzkiej, w buforze fosforanowym o pH= 6,5i w roztworach rzeczywistych (mocz) oraz w tych roztworach w obecności 1% i 5 %glukozy (cukrzyca), furosemidu (lek moczopędny) o stężeniu 80 mg L -1 coodpowiada dawce furosemidu na dobę, a także w obecności cukru i furosemidu.(podawanie leku chorym na cukrzycę). Do określania stężenia białka zastosowanobarwnik Comassie Brillant Blue G-250 (CBB) oraz porównawczo jony srebra Ag + .Wartości otrzymane w wyniku rozdziału albuminy oraz albuminy z 1% i 5% glukozą,wybarwianej dwiema metodami, wskazują że obecność glukozy powodujezmniejszenie pola powierzchni plamek albuminy, co wskazuje na pozornezmniejszenie stężenia albuminy. Zmiany te są większe przy większym stężeniu.W stosowanej metodzie przy wybarwianiu żelu metodą AgNO 3 zmiany są bardziejwidoczne. Zmniejszenie stężenia jest pozorne i wiąże się prawdopodobnie z glikacjąalbuminy w miejscach łączenia albuminy z barwnikiem. Wyniki dla procesuelektroforezy albuminy i albuminy z dodatkiem furosemidu o stężeniu 80 mg L -1wskazują na pozorne zwiększenie stężenia albuminy, za co odpowiedzialne jestpowstawanie kompleksu albumnia-lek, który wpływa na zmianę konformacji białkai uwalnia dostęp cząsteczek barwnika do aktywnych grup albuminy. Analiza roztworuzawierającego 5% glukozy i 80 mgl -1 furosemidu w roztworze albuminy wskazujezmniejszenie pola powierzchni plamek do wartości zbliżonej do tej, którą otrzymanow obecności tylko 5% glukozy. Świadczyłoby to o silniejszym oddziaływaniu na95