V 32 N 69 FA

SOUSA PERERA, R., AZAROLLA BARRERA, J., VEGA ARREGUÍN, J., RAMÍREZ PRADO, H., ZÚÑIGA AGUILAR, J.J. Y LIZAMA UC, G.
RT-PCR del gen SNE1 en diferentes tiempos después de la
infección de Capsicum chinense.
Figura 5. Análisis por RT.PCR de Sne1 durante el inicio de la infección de
C. chinense con P. capsici. Carril 1: Marcador de masa molecular de 1kb;
Carril (2-7): Productos de RT-PCR en diferentes horas posteriores a la
inoculación (6, 12, 24, 36, 48 y 60 horas).
En cuanto al análisis por RT-PCR utilizando cDNA de
diferentes tiempos después de la infección con los cebadores
específicos de P. capsici que amplifican el gen Ypt1, se
observó una amplificación de 364 pb, que es el tamaño
esperado, en todos los tiempos utilizados (Fig. 6). Esto indica
que la amplificación de cDNA es de P. capsici y no de
Capsicum chinense solamente. También se corroboró, que la
proporción del gen Ypt1 fue muy baja como lo sucedido
anteriormente con Sne1, por lo que se realizó, de igual forma,
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una re-amplificación del primer producto de PCR para poder
detectar la presencia del gen.
Figura 6. Análisis por RT-PCR de Ypt1 durante el inicio de la infección de
C. chinense con P. capsici. Carril 1: Marcador de masa molecular de 1kb;
Carril (2-7): Productos de RT-PCR en diferentes horas posteriores a la
inoculación (6, 12, 24, 36, 48 y 60 horas).
CONCLUSIONES
Las cuatro secuencias obtenidas tienen un alto porcentaje de
similitud con Sne1 de Phytophthora infestans por lo que se
infiere que son homólogas. Las primeras 48 h de infección de
Capsicum chinense por Phytophthora capsici corresponden
a la fase de biotrofía ya que se observa una fase asintomática.
Después de las 48 horas se observaron síntomas de
necrosamiento en el tallo y adelgazamiento del mismo, así
como defoliación de la planta, por lo que inferimos que
corresponde a la fase necrotrófica. El modelo de interacción
P. capsici-C.chinene establecido resultó exitoso debido a que
se logró distinguir de manera fenotípica las fases de biotrofía
y necrotrofía y pudimos controlar las condiciones de la
interacción, de tal manera que no afectara el experimento con
contaminantes externos. Posteriormente este modelo sirvió
para estudiar los niveles de expresión del gen Sne1 debido a
que es inducible y solo se expresa durante la interacción. Los
análisis de la expresión del gen utilizando cDNA mostraron
que el gen Sne1 comienza a expresarse a partir de las 6 horas
después de la infección. Del cDNA obtenido, de P. capsici
comprende en una menor proporción. Esto se pudo
corroborar ya que en ambas RT-PCR, tanto para el gen Sne1
como para Ypt1, se tuvo que realizar una re-amplificación del
producto de la primera reacción para poder detectar la
presencia de dichos genes.
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REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO MÉRIDA Vol. 32 NÚM. 69 61