!№4(96) ТОМ 2 тп отпр
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
‘ № 4(<strong>96</strong>) август 2016 г. / том 2<br />
ÏÐÀÊÒÈ×ÅÑÊÀß ÌÅÄÈÖÈÍÀ 107<br />
In this article is studied the content of the marker Ki-67, the activity of the exfoliative processes, the number of degranulated mast<br />
cells in the connective tissue structures of the periodontium of patients burdened with chronic generalized periodontitis. Also, has been<br />
established the oppression of proliferation processes in the structures of the stratified squamous epithelium of the gums, the increase<br />
in the content of degranulated mast cells, the reinforcement of the exfoliation processes in the keratinized epithelium in the patients<br />
of the study group. The findings make actual search of methods of proliferative processes regulation in the epithelium of the gingiva.<br />
Key words: chronic generalized periodontitis, a marker of proliferation Ki-67, mast cells, exfoliation of epithelial cells.<br />
Сложность прогнозирования течения воспа лительно-деструктивных<br />
поражений пародонта, особенно<br />
на ранних стадиях развития процесса, побуждают<br />
к поиску диагностичесwких критериев,<br />
позволяющих оценить глубину вовлечения различных<br />
структур пародонта. Эта ситуация свидетельствует<br />
об актуальности совершенствования комплекса<br />
диагностических мероприятий для пациентов,<br />
отягощенных хроническим генерализованным<br />
пародонтитом [1-3].<br />
Деструкция тканей пародонта при тяжелой степени<br />
воспалительного процесса обусловлена глубокими<br />
нарушениями клеточного гомеостаза ―<br />
активацией апоптоза на фоне резкого угнетения<br />
пролиферативной активности эпителия [4]. Многослойный<br />
плоский ороговевающий эпителий десны<br />
выполняет функцию барьерной защиты для комплекса<br />
пародонтальных тканей; его пролиферативной<br />
активностью обеспечивается состоятельность<br />
этого барьера. Важная роль в прогрессировании<br />
нарушений клеточного гомеостаза эпителиоцитов<br />
слизистой оболочки десны при воспалительных заболеваниях<br />
пародонта принадлежит маркеру Ki-67,<br />
тучным клеткам [5-9]. По уровню экспрессии Ki-67<br />
можно судить о пролиферативной активности клеток<br />
[10]. Изменения данного маркера, количества<br />
и степени дегрануляции тучных клеток в тканях<br />
пародонта при воспалительно-деструктивных поражениях<br />
недостаточно изучены [11-13]. В свою<br />
очередь, умение интерпретировать результаты исследований<br />
клеточной пролиферации эпителиоцитов<br />
десны позволят улучшить раннюю диагностику<br />
воспалительно-деструктивных процессов в тканях<br />
пародонта [4, 14].<br />
Цель исследования заключалась в определении<br />
влияния хронического воспалительнодеструктивного<br />
процесса в тканях пародонта на<br />
пролиферацию эпителия и фибробластов соединительнотканного<br />
слоя десны.<br />
Материал и методы исследования<br />
Обследованы 25 пациентов (10 мужчин и 15 женщин<br />
в возрасте 20-36 лет) с интактным пародонтом,<br />
обратившиеся в Республиканскую стоматологическую<br />
поликлинику (г. Чебоксары) с целью оказания<br />
плановой санационной помощи (группа сравнения).<br />
Исследуемая группа представлена 30 пациентами<br />
сопоставимого гендерно-возрастного состава; пациенты<br />
исследуемой группы были отягощены хроническим<br />
генерализованным пародонтитом легкой/<br />
средней степени тяжести. Критериями включения в<br />
исследуемую группу явились: отягощенность хроническим<br />
генерализованным пародонтитом, согласие<br />
на участие в проведении исследований. Критериями<br />
исключения явились: отягощенность соматической<br />
патологией (для исключения влияния<br />
заболеваний желудочно-кишечного тракта и эндокринной<br />
системы на пролиферативную активность<br />
мукозальных эпителиоцитов), прием витаминных и<br />
минеральных комплексов, оральных контрацепти-<br />
вов, алкогольная и табачная зависимость. Верификация<br />
пародонтологического диагноза проводилась<br />
с использованием пародонтологических индексов<br />
и трехмерной конусно-лучевой дентальной рентгеновской<br />
компьютерной томографии.<br />
Пациентам, участвующим в исследовании, проводился<br />
забор тканей десневого сосочка (в области<br />
седла) в процессе проведения закрытого кюретажа.<br />
Выполнялась инфильтрационная анестезия 2% раствором<br />
лидокаина. Полученный биоматериал фиксировали<br />
в 4% параформальдегиде и заливали в<br />
парафин. Из блоков изготавливали срезы толщиной<br />
5-7 мкм. Для изучения распределения тучных клеток<br />
срезы десны окрашивали полихромным толуидиновым<br />
синим по методике Унна. Метод основан<br />
на использовании спиртового раствора двух красителей<br />
― метиленового синего и полихромного толуидинового<br />
синего. Сочетание этих двух красителей<br />
позволяет одномоментно оценить количественное<br />
распределение тучных клеток в тканях десны, и получить<br />
представление о степени сульфатированности<br />
кислых мукополисахаридов в гранулах тучных<br />
клеток.<br />
По состоянию мукополисахаридов тучные клетки<br />
оценивали следующим образом [15]:<br />
α-ортохромные тучные клетки с голубой окраской<br />
цитоплазмы и гранул;<br />
β1-метахроматичные тучные клетки с гранулами<br />
темно-синего цвета;<br />
β2-метахроматичные тучные клетки, имеющие<br />
фиолетовую окраску гранул;<br />
β3-метахроматичные тучные клетки с краснофиолетовыми<br />
гранулами.<br />
По степени дегрануляции, согласно классификации<br />
Линднер Д.П. (1989) и Стручко Г.Ю. (1999), выделяли<br />
следующие формы тучных клеток [15]:<br />
Т0 формы ― гранулы расположены плотно в цитоплазме,<br />
ядро клетки визуально не определяется;<br />
Т1 формы ― ядро просматривается хорошо, гранулы<br />
располагаются внутри клетки, за пределы цитоплазматической<br />
мембраны не выходят;<br />
Т2 формы ― гранулы частично выходят за пределы<br />
неповрежденной цитоплазматической мембраны;<br />
Т3 формы ― полностью дегранулированные, опустошенные<br />
клетки, либо с разорванной цитоплазматической<br />
мембраной.<br />
Ki-67 выявляли непрямым иммуногистохимическим<br />
методом [16]. В качестве первых антител использовали<br />
моноклональные мышиные антитела к<br />
Ki-67 в разведении 1:100 (Novocastra, Великобритания)<br />
на 0,05 М трис-буфере с рН 7,4 с добавлением<br />
0,15 М натрия хлорида. Визуализацию антигенов<br />
проводили с помощью системы EnVision, конъюгированной<br />
с пероксидазой (K 4002, DakoCytomation,<br />
Дания). Выявление пероксидазы проводили с использованием<br />
3,3-диаминобензидина [16]. Продукт<br />
реакции окрашивался в коричневый цвет. В качестве<br />
контроля специфичности окрашивания применяли<br />
такую же процедуру обработки срезов, но<br />
вместо первых антител использовали нормальную<br />
ÈÍÍÎÂÀÖÈÎÍÍÛÅ ÒÅÕÍÎËÎÃÈÈ Â ÌÅÄÈÖÈÍÅ / ÒÎÌ 2