‘ № 4(<strong>96</strong>) август 2016 г. / том 2 ÏÐÀÊÒÈ×ÅÑÊÀß ÌÅÄÈÖÈÍÀ 107 In this article is studied the content of the marker Ki-67, the activity of the exfoliative processes, the number of degranulated mast cells in the connective tissue structures of the periodontium of patients burdened with chronic generalized periodontitis. Also, has been established the oppression of proliferation processes in the structures of the stratified squamous epithelium of the gums, the increase in the content of degranulated mast cells, the reinforcement of the exfoliation processes in the keratinized epithelium in the patients of the study group. The findings make actual search of methods of proliferative processes regulation in the epithelium of the gingiva. Key words: chronic generalized periodontitis, a marker of proliferation Ki-67, mast cells, exfoliation of epithelial cells. Сложность прогнозирования течения воспа лительно-деструктивных поражений пародонта, особенно на ранних стадиях развития процесса, побуждают к поиску диагностичесwких критериев, позволяющих оценить глубину вовлечения различных структур пародонта. Эта ситуация свидетельствует об актуальности совершенствования комплекса диагностических мероприятий для пациентов, отягощенных хроническим генерализованным пародонтитом [1-3]. Деструкция тканей пародонта при тяжелой степени воспалительного процесса обусловлена глубокими нарушениями клеточного гомеостаза ― активацией апоптоза на фоне резкого угнетения пролиферативной активности эпителия [4]. Многослойный плоский ороговевающий эпителий десны выполняет функцию барьерной защиты для комплекса пародонтальных тканей; его пролиферативной активностью обеспечивается состоятельность этого барьера. Важная роль в прогрессировании нарушений клеточного гомеостаза эпителиоцитов слизистой оболочки десны при воспалительных заболеваниях пародонта принадлежит маркеру Ki-67, тучным клеткам [5-9]. По уровню экспрессии Ki-67 можно судить о пролиферативной активности клеток [10]. Изменения данного маркера, количества и степени дегрануляции тучных клеток в тканях пародонта при воспалительно-деструктивных поражениях недостаточно изучены [11-13]. В свою очередь, умение интерпретировать результаты исследований клеточной пролиферации эпителиоцитов десны позволят улучшить раннюю диагностику воспалительно-деструктивных процессов в тканях пародонта [4, 14]. Цель исследования заключалась в определении влияния хронического воспалительнодеструктивного процесса в тканях пародонта на пролиферацию эпителия и фибробластов соединительнотканного слоя десны. Материал и методы исследования Обследованы 25 пациентов (10 мужчин и 15 женщин в возрасте 20-36 лет) с интактным пародонтом, обратившиеся в Республиканскую стоматологическую поликлинику (г. Чебоксары) с целью оказания плановой санационной помощи (группа сравнения). Исследуемая группа представлена 30 пациентами сопоставимого гендерно-возрастного состава; пациенты исследуемой группы были отягощены хроническим генерализованным пародонтитом легкой/ средней степени тяжести. Критериями включения в исследуемую группу явились: отягощенность хроническим генерализованным пародонтитом, согласие на участие в проведении исследований. Критериями исключения явились: отягощенность соматической патологией (для исключения влияния заболеваний желудочно-кишечного тракта и эндокринной системы на пролиферативную активность мукозальных эпителиоцитов), прием витаминных и минеральных комплексов, оральных контрацепти- вов, алкогольная и табачная зависимость. Верификация пародонтологического диагноза проводилась с использованием пародонтологических индексов и трехмерной конусно-лучевой дентальной рентгеновской компьютерной томографии. Пациентам, участвующим в исследовании, проводился забор тканей десневого сосочка (в области седла) в процессе проведения закрытого кюретажа. Выполнялась инфильтрационная анестезия 2% раствором лидокаина. Полученный биоматериал фиксировали в 4% параформальдегиде и заливали в парафин. Из блоков изготавливали срезы толщиной 5-7 мкм. Для изучения распределения тучных клеток срезы десны окрашивали полихромным толуидиновым синим по методике Унна. Метод основан на использовании спиртового раствора двух красителей ― метиленового синего и полихромного толуидинового синего. Сочетание этих двух красителей позволяет одномоментно оценить количественное распределение тучных клеток в тканях десны, и получить представление о степени сульфатированности кислых мукополисахаридов в гранулах тучных клеток. По состоянию мукополисахаридов тучные клетки оценивали следующим образом [15]: α-ортохромные тучные клетки с голубой окраской цитоплазмы и гранул; β1-метахроматичные тучные клетки с гранулами темно-синего цвета; β2-метахроматичные тучные клетки, имеющие фиолетовую окраску гранул; β3-метахроматичные тучные клетки с краснофиолетовыми гранулами. По степени дегрануляции, согласно классификации Линднер Д.П. (1989) и Стручко Г.Ю. (1999), выделяли следующие формы тучных клеток [15]: Т0 формы ― гранулы расположены плотно в цитоплазме, ядро клетки визуально не определяется; Т1 формы ― ядро просматривается хорошо, гранулы располагаются внутри клетки, за пределы цитоплазматической мембраны не выходят; Т2 формы ― гранулы частично выходят за пределы неповрежденной цитоплазматической мембраны; Т3 формы ― полностью дегранулированные, опустошенные клетки, либо с разорванной цитоплазматической мембраной. Ki-67 выявляли непрямым иммуногистохимическим методом [16]. В качестве первых антител использовали моноклональные мышиные антитела к Ki-67 в разведении 1:100 (Novocastra, Великобритания) на 0,05 М трис-буфере с рН 7,4 с добавлением 0,15 М натрия хлорида. Визуализацию антигенов проводили с помощью системы EnVision, конъюгированной с пероксидазой (K 4002, DakoCytomation, Дания). Выявление пероксидазы проводили с использованием 3,3-диаминобензидина [16]. Продукт реакции окрашивался в коричневый цвет. В качестве контроля специфичности окрашивания применяли такую же процедуру обработки срезов, но вместо первых антител использовали нормальную ÈÍÍÎÂÀÖÈÎÍÍÛÅ ÒÅÕÍÎËÎÃÈÈ Â ÌÅÄÈÖÈÍÅ / ÒÎÌ 2
108 ÏÐÀÊÒÈ×ÅÑÊÀß ÌÅÄÈÖÈÍÀ ‘ № 4(<strong>96</strong>) август 2016 г. / том 2 Таблица. Индекс дегрануляции, формы степени дегрануляции тучных клеток и характер метахромазии тучных клеток у пациентов исследуемой группы и группы сравнен Группа Группа сравнения ХГП Индекс дегрануляции 0,57±0,1* Слои собственной пластинки сосочковый Формы степени дегрануляции (показатель числа тучных клеток в одном поле зрения при ув. 1000) Характер метахромазии ТК, % То Т1 Т2 Т3 α β1 β2 β3 1,6±0,5 1,5±0,6** 1,3±0,5* 1,1±0,2** 29,3 38,7 32 - 0,32±0,05 сетчатый 2,2±0,8 1,7±0,4** 1,6±0,5* 1,2±0,3** 49,5 15,4 35,1 - 0,64±0,1* сосочковый 2,0±1,1 2,4±0,7** 2,3±0,5* 2,0±0,6** 37 22,6 40,4 - 0,44±0,2 сетчатый 1,4±0,4 1,9±0,5** 1,9±0,9* 2,0±0,7** 40,6 24,2 26,6 8,6 Примечание: * ― p
Change language