virus del papiloma humano y cáncer: epidemiología y prevención ...

Marta Ortiz Rivera, Montserrat Torres Hortal, Alfredo García Sáiz
genética entre los diferentes tipos y variantes. Los métodos aplicados a la
identificación de la infección deben ser diseñados de forma que sean capaces
de detectar con una elevada sensibilidad el mayor número de tipos.
Paralelamente, los métodos aplicados al tipado y caracterización deben ser lo
suficientemente específicos para discriminarlos.
El objetivo del presente capítulo es revisar los diferentes métodos moleculares
aplicados en la actualidad al diagnóstico y a la caracterización del VPH,
así como los aspectos técnicos a tener en cuenta en su aplicación.
5.2. Métodos de detección del genoma del VPH
La mayor parte de los métodos de identificación directa de infección por
VPH están basados en la detección del ADN del virus, aunque también se han
desarrollado sistemas basados en la detección del ARN.
De manera ideal, un método para la detección del ADN del VPH debe ser
capaz de detectar e identificar la presencia de múltiples tipos del VPH. Debe
además realizarse con facilidad, con alta reproducibilidad y una elevada
especificidad y sensibilidad.
La Figura 5.1 muestra el algoritmo de diagnóstico y caracterización del
VPH mediante detección del genoma que va a ser analizado detalladamente
a continuación.
5.2.1. Recogida de muestras, conservación y procesamiento
La calidad, cantidad y condiciones de almacenamiento de las muestras clínicas
son factores que pueden afectar a la sensibilidad de los diferentes métodos
de detección del genoma viral del VPH. Los métodos que no requieren la
extracción de los ácidos nucleicos para su realización, como es el caso del
test de la captura de híbridos 2 (Hybrid Capture ® hc2 HPV DNA Test y hc2
High Risk DNA Test - de Digene Corporation, Estados Unidos de América), no
son tan dependientes de estas variables. En la actualidad se han desarrollado
diferentes medios de transporte de muestra que conservan la integridad de las
células y, por tanto, de las proteínas, del ADN viral y del ARN. Entre ellos
cabe destacar PreserCyt ® (Cytyc Corporation, Estados Unidos de América) y el
medio Specimen Transport Medium - STM (Digene Corporation, Estados
Unidos de América), los cuales permiten, a partir de una misma muestra, realizar
el análisis patológico y los análisis moleculares de detección del VPH.
Las técnicas de detección del genoma viral mediante amplificación por
reacción en cadena de la polimerasa (PCR) requieren el aislamiento previo de
los ácidos nucleicos, ADN y/o ARN. En la actualidad, existen múltiples sistemas
de extracción de ácidos nucleicos, muchos de ellos disponibles comercialmente
(QIAmp DNA kit, Qiagen, Hilden, Germany; DNA isolation Kit,
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