virus del papiloma humano y cáncer: epidemiología y prevención ...

Marta Ortiz Rivera, Montserrat Torres Hortal, Alfredo García Sáiz
• Muestras recogidas con un dispositivo tipo cepillo o con una combinación
escobillón/espátula y situadas en solución, PreservCyt ® (Cytyc
Corporation, Estados Unidos de América).
• Biopsias recogidas en medio de transporte de muestra, STM.
Las muestras recogidas en medio de transporte STM pueden mantenerse un
máximo de dos semanas a temperatura ambiente y enviarse al laboratorio sin
refrigerar, donde se conservarán entre 2°-8°C si el ensayo se va a realizar en
el plazo de una semana. Para períodos de conservación más prolongados,
deberán almacenarse a -20°C por un período no superior a 3 meses. El medio
de transporte específico contiene un conservante que garantiza la integridad
del ADN y retarda el crecimiento bacteriano; sin embargo, no garantiza la viabilidad
celular.
El método de determinación del VPH mediante hc2 HPV DNA Test ha sido
utilizado ampliamente en el diagnóstico de la infección, presentando una elevada
reproducibilidad. El hecho de ser una técnica estandarizada, validada y
con la posibilidad de automatización del proceso -Rapid Capture System
(Digene Corporation, Estados Unidos de América)- hace que sea una técnica
de elección para el cribado inicial y seguimiento de pacientes. Sin embargo,
la prueba presenta una serie de limitaciones:
• Sólo discrimina entre tipos de alto y bajo riesgo, no permitiendo la identificación
tipo-específica del VPH.
• Se han descrito hibridaciones cruzadas entre las dos mezclas de sondas
y con tipos no incluidos en las mismas (VPHs 6, 11, 26, 40, 42, 53, 54,
61, 66, 70, 73, 81, MM4, IS39, CP6108).
• Su sensibilidad es inferior a la PCR.
5.2.3. Métodos de amplificación de secuencias diana
La técnica de PCR es el método de amplificación de secuencias diana más
frecuentemente utilizado. En la detección y tipado del VPH se han utilizado
diferentes diseños de sistemas de PCR que incluyen los específicos de tipo y
los sistemas denominados de amplio espectro.
Las PCR específicas de tipo utilizan cebadores que han sido diseñados
para detectar un tipo determinado del VPH; por tanto, la detección de diferentes
tipos implica la realización de múltiples reacciones de PCR. Los diseños
de PCR múltiple (múltiples cebadores específicos de tipo en una única reacción)
simplifican la realización de la técnica, pero la estandarización del
método suele ser compleja.
Los sistemas de PCR de amplio espectro son los más utilizados en la detección
del VPH y la mayoría están diseñados en la región L1, dado que es una
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