virus del papiloma humano y cáncer: epidemiología y prevención ...

• La reacción se detecta mediante la adición de un sustrato quimioluminiscente
y la utilización de un luminómetro. Los resultados se expresan
como unidades de luz relativas (RLU) y son proporcionales a la cantidad
de ADN de VPH presente en la muestra biológica, lo que aporta una
medida semicuantitativa de la carga viral.
MUESTRA
(raspado cervical y otros)
Determinación de VPH: aspectos técnicos
Liberación y desnaturalización del ADN del VPH mediante tratamiento con hidróxido sódico
Hibridación del ADN con las sondas ARN específicas del VPH
(Alto riesgo: VPHs 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 y 68)
Anticuerpos de cabra policlonales anti-ARN: ADN en superficie de microplaca
Anticuerpos anti-ARN: ADN conjugados con fosfatasa alcalina
Sustrato quimioluminiscente
RESULTADO
Figura 5.2
Esquema de la metodología Hybrid Capture ® (hc).
La sensibilidad de la técnica es de 1 picogramo (pg.) de ADN de VPH 16
clonado por mililitros (ml.) de muestra, lo que equivale a 100.000 copias por
ml. de muestra ó 5.000 copias por ensayo. El límite de detección para los dieciocho
tipos de VPHs incluidos en las sondas de alto y bajo riesgo según las
instrucciones del fabricante varía entre 0,62-1,39 pg. por ml. de muestra, con
un valor promedio de 1,09 equivalente a 109.000 copias.
La prueba de determinación del VPH mediante hc2 HPV DNA Test, puede
realizarse a partir de muestras cervicouterinas recogidas en:
• HC Cervical sampler o DNAPap Cervical Sampler (Digene Corporation,
Estados Unidos de América), compuesto por una escobilla cervical
Digene y medio de transporte de muestra (Specimen Transport Medium,
STM, Digene Corporation, Estados Unidos de América).
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