virus del papiloma humano y cáncer: epidemiología y prevención ...

Marta Ortiz Rivera, Montserrat Torres Hortal, Alfredo García Sáiz
La empresa Roche Diagnostics ha desarrollado Amplicor HPV DNA
test en microplaca para la detección de trece tipos de VPHs de alto riesgo.
El método está basado en la detección de un fragmento de 165 pb. del
gen L1, mediante hibridación con una mezcla de sondas específicas.
Debido a las características del ensayo permite la detección del VPH, pero
no el tipado.
La hibridación reversa en tira es el método más utilizado para el tipado y
la detección de infecciones múltiples por VPHs. En este diseño se realiza la
hibridación de los productos de PCR con múltiples sondas específicas de tipo,
inmovilizadas en un soporte sólido (tira de nitrocelulosa). Los productos de
amplificación, generalmente marcados con biotina, son desnaturalizados en
condiciones alcalinas e hibridados con sondas específicas. Los híbridos son
posteriormente detectados mediante una reacción colorimétrica. Las empresas
Innogenetics y Roche Diagnostics han desarrollado dos sistemas representativos
de esta tecnología: INNO-LIPA HPV y Linear Array Genotyping HPV
test, respectivamente.
Los microarrays genéticos suponen un nuevo abordaje para la caracterización
mediante técnicas de hibridación de productos de PCR. En los últimos
años se han desarrollado diferentes sistemas basados en dicha tecnología,
algunos de ellos disponibles en el mercado como PapilloCheck ® (Greiner Bioone,
Alemania) y Clinical Array-papillomavirus (Genomica SAU, España).
5.2.5. Comparación de los diferentes métodos de detección de tipos del
VPH
En las Tablas 5.1 y 5.2 se muestran los métodos de detección del VPH más
ampliamente utilizados, sus características técnicas y los tipos que son capaces
de detectar. Si bien todos ellos son capaces de identificar un elevado
número de tipos, se han documentado diferencias en su sensibilidad frente a
tipos específicos, fundamentalmente en muestras con más de un tipo de VPH.
En este sentido, el sistema PGMY09/11 es más sensible en la detección de los
VPHs 26, 35, 42, 45, 52, 54, 55, 59 y 83 que el sistema MY09/1112 . De la
misma forma, el sistema GP5+/GP6+ detecta tipos que el sistema MY09/11 o
no detecta o lo hace con menor eficacia como es el caso de los VPHs 30, 42,
43, 51, 59, 67, 74, 90 y 913, 4, 9 .
Es importante considerar que, en los sistemas de PCR basados en la utilización
de cebadores degenerados, la eficacia de la amplificación de los diversos
tipos no es igual y va a depender del grado de identidad de la secuencia
del VPH y del cebador. Así mismo, en muestras con múltiples tipos de VPH, la
amplificación de los mismos va a depender de la carga viral de cada uno de
ellos, pudiendo quedar enmascarados aquéllos con cargas virales bajas.
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