virus del papiloma humano y cáncer: epidemiología y prevención ...

de las regiones más conservadas dentro del genoma de los VPHs 3-10 . La Figura 5.3
muestra los más utilizados. Existen tres diseños diferentes de cebadores consenso.
En primer lugar, están aquéllos que incluyen una pareja única de cebadores,
diseñados sobre una región conservada, pero que sólo se “aparean”
completamente con algunos tipos del VPH. Para compensar los desapareamientos,
la PCR se realiza a bajas temperaturas de anillamiento. Los cebadores
Primer General (GP) 5+/6+ son un ejemplo representativo 10 . El segundo
tipo de cebadores consenso incorpora varias parejas de cebadores, que contienen
una o más posiciones degeneradas para compensar las variaciones
intertípicas en los lugares de la secuencia a los que se unen los cebadores.
Entre ellos cabe destacar el sistema MY09/MY11. El tercer diseño consiste en
combinar una serie de parejas de cebadores diferentes que se unen en las mismas
posiciones del genoma. A menudo contienen inosina en sus secuencias.
Ejemplos de este tipo de cebadores son PGMY y SPF10.
E6
E7
E1
E2 E5
E4
Determinación de VPH: aspectos técnicos
Opb. 1.000 2.000 3.000 4.000 5.000 6.000 7.000 ≈7.900pb.
MY09/11/PGMY
Roche Amplicor
GP5+/6+
SPF10
≈65pb.
Figura 5.3
Localización de los diferentes sistemas de cebadores utilizados en la detección por PCR del VPH.
Otros sistemas de PCR de amplio espectro han sido diseñados en diferentes
regiones del genoma como E1, aunque su uso no se ha generalizado en
los laboratorios.
La técnica de PCR en tiempo real se ha introducido en los últimos años en
el diagnóstico molecular del VPH como herramienta para la determinación
cuantitativa de la carga viral así como para el diagnóstico de la infección. La
95
L2
≈165pb.
≈150pb.
≈450pb.
L1