Studio dell'aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces ...

La caratterizzazione molecolare del presente lavoro è volta alla
biotipizzazione dei ceppi vinari di Saccharomyces cerevisiae isolati dai vini
florizzati (Vernaccia, Malvasia e Arvisionadu), ovvero alla differenziazione
dei ceppi all’interno della specie di appartenenza (Mannazzu e Budroni,
2005).
L’importanza della biotipizzazione all’interno della specie è fondamentale
in enologia per gli studi della biodiversità dei S. cerevisiae associati
all’ambiente cantina e per valutare l’esistenza di ceppi specifici di
determinate aree.
In questo lavoro la caratterizzazione molecolare è stata fatta con i
marcatori molecolari minisatelliti. I minisatelliti appartengono al gruppo
degli SSLP (Simple Sequence Lenght Polymorphism), insiemi di sequenze
ripetute che mostrano variazioni di lunghezza e i cui differenti alleli
contengono quantità diverse di unità ripetitive, nei minisatelliti o VNTR
(Variable Number of Tandem Repeat) l’unità ripetitiva è lunga fino a 25 bp
e forma raggruppamenti fino a 25 kb (Brown, 1999).
Recentemente è stata scoperta la presenza di minisatelliti in alcuni geni di
parete di S. cerevisiae che si comportano come siti di ricombinazione
genica e causano polimorfismo di lunghezza dei geni stessi (Bishop et al.,
2000; Mannazzu et al., 2002; Marinangeli et al., 2004), pertanto possono
essere utilizzati come bersagli molecolari per la caratterizzazione
mediante PCR-fingerprinting dei lieviti vinari.
I quattro geni di parete di S. cerevisiae amplificati, AGA1, DAN4, HSP150
e SED1 si sono rivelati un ottimo strumento di caratterizzazione. In
accordo con Marinangeli et al. (2004) è stata confermata la presenza,
all’interno delle ORFs dei geni amplificati, di minisatelliti che creano
variazioni di lunghezza negli amplificati ottenuti da ceppi diversi. L’unica
eccezione è rappresentata dal ceppo V3 isolato da Vernaccia per il quale
non è stato individuato alcun amplicone per il gene AGA1.
AGA1 è un gene localizzato sul cromosoma XIV e codifica per una delle
due subunità che compongono la a-agglutinina. Le a- e α-agglutinine sono
glicoproteine di parete prodotte dalle cellule a ed α di Saccharomyces
Pinna Claudia
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Studio dell’aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces cerevisiae
Tesi di Dottorato in Biotecnologie Microbiche Agroalimentari
Università degli Studi di Sassari