Studio dell'aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces ...

pm per 5 minuti e le cellule sono state lavate con acqua distillata. Il pellet
è stato trasferito in becker da 200 ml contenenti 150 ml di MF e incubato
in statico a 25°C per 7 giorni. Il biofilm è stato recuperato impiegando un
sistema costituito da un tubo di silicone portante ad una estremità un
puntale e collegato all’altra estremità con una beuta. La beuta è stata
collegata alla pompa del vuoto; la pressione negativa ha aspirato il biofilm
che è stato raccolto in tubi Falcon. Il materiale cellulare è stato raccolto su
filtri di nitrocellulosa di peso noto (diametro filtri 0,2 µm) ed essiccato in
stufa a 50° C per 72 ore. I filtri con il pellet essiccato sono stati
nuovamente pesati: la quantità di biofilm, espressa in grammi, è stata
calcolata per differenza tra il peso del filtro con le cellule del biofilm meno
il peso del filtro tal quale. Per ogni ceppo la prova è stata condotta in triplo.
Test di crescita invasiva (Guo et al. 2000)
I ceppi sono stati strisciati su piastre di YPD e messi ad incubare a 30° C
per 3 giorni. L’abilità di aderire all’agar è stata valutata come capacità
delle cellule di resistere alla rimozione dalla superficie del terreno colturale
provocata da un getto d’acqua. Le piastre sono state fotografate prima e
dopo il lavaggio. La prova è stata condotta in triplo e su ogni piastra era
presente il ceppo di laboratorio S288c come controllo negativo.
Test di crescita pseudoifale (Guo et al. 2000)
É stata saggiata strisciando i ceppi su terreno SLAD in maniera tale da
separare le singole cellule; le colonie formatesi dopo una settimana di
incubazione a 30 °C sono state osservate al microscopio ottico e
fotografate. La prova è stata condotta in triplo.
Formazione del mat cellulare (Reynolds & Fink, 2001)
La formazione di strutture multicellulari complesse chiamate mat, è stata
osservata pipettando 25 microlitri di una coltura cellulare su piastre di YPD
allo 0,3% di agar (soft agar). Le piastre, messe ad incubare a 25° C per 14
Pinna Claudia
Studio dell’aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces cerevisiae
Tesi di Dottorato in Biotecnologie Microbiche Agroalimentari
Università degli Studi di Sassari
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