Studio dell'aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces ...

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La caratterizzazione tecnologica realizzata in questa lavoro di tesi, ha permesso di individuare un gruppo di ceppi flor da poter impiegare come starter per la produzione dei vini florizzati. Il risultato ottenuto soddisfa l’esigenza di salvaguardia dei prodotti di nicchia per i quali non esistono in commercio ceppi starter. Inoltre, la possibilità di disporre di alcuni ceppi selezionati, permette di condurre la vinificazione con risultati certi sulla qualità finale del prodotto e, in particolare, di gestire al meglio la delicata fase di florizzazione. Inoltre, la caratterizzazione molecolare realizzata con i marcatori molecolari minisatelliti, impiegata per la prima volta in ceppi flor, si è dimostrata un valido strumento per descrivere la biodiversità dei ceppi studiati. I risultati ottenuti nei test di florizzazione realizzati in questo lavoro hanno evidenziato differenze tra i ceppi flor nell’attitudine alla formazione di biofilm. Tenuto conto del legame tra formazione del biofilm e espressione del gene FLO11 dimostrato da vari autori, si è scelto di verificare se ad una diversa capacità di formazione del biofilm, poteva corrispondere una differente taglia di FLO11 e delle zone interne ripetute. I risultati ottenuti hanno consentito di individuare un elevato polimorfismo del gene e delle zone ripetute. Inoltre, considerato che l’adesina Flo11 è coinvolta in numerosi fenomeni di adesione cellulare e che Verstrepen e collaboratori (2005) hanno suggerito che a una maggiore taglia del gene e delle zone Pinna Claudia 124 Studio dell’aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces cerevisiae Tesi di Dottorato in Biotecnologie Microbiche Agroalimentari Università degli Studi di Sassari
interne di Flo1 corrispondono delle capacità adesive più marcate, sono stati studiati i fenotipi legati all’espressione del gene FLO11. Le prove svolte in questo lavoro dimostrano che i ceppi flor, con background genetici diversi, si comportano diversamente rispetto a quanto riportato per i ceppi isogenici di laboratorio. In particolare si è visto che ceppi con gene e zone interne di piccola dimensione sono buoni produttori di biofilm e posseggono spiccate proprietà adesive, mentre ceppi la cui ORF è molto estesa sono cattivi produttori di biofilm e hanno scarse capacità adesive. Pertanto sono state svolte ulteriori indagini molecolari per meglio comprendere la natura di queste differenze. Si è quindi scelto di analizzare l’espressione del gene FLO11 in fase di formazione del biofilm, in cinque ceppi che fossero rappresentativi della popolazione studiata. Tuttavia i risultati dello studio di espressione hanno spiegato solo parzialmente i diversi comportamenti adesivi mostrati dai ceppi: si è visto che il ceppo M23 con FLO11 e zone ripetute di 3,1 e 0,9 Kb ha un elevato livello di induzione, e che in V80, con gene e zone ripetute di 6,1 e 3,2 Kb, questi valori sono decisamente inferiori. Considerato che l’espressione del gene FLO11 è guidata da un promotore estremamente complesso la cui regolazione è influenzata da un elevato numero di fattori, sono state analizzate le sequenze del promotore di quattro ceppi, e si è osservato che in tre di questi è presente una delezione che riguarda una ben nota sequenza di repressione. Ciò potrebbe spiegare gli elevati valori di induzione osservati nel ceppo M23 ma non per il ceppo V23. Nel ceppo V80 la mancanza di tale delezione potrebbe essere in parte responsabile del minor livello di induzione di FLO11. Per meglio valutare il legame esistente tra estensione del gene e delle zone interne e intensità dei fenotipi adesivi, e per escludere l’influenza dei diversi background genetici, si è scelto di clonare tre taglie del gene, derivate da tre ceppi flor, in un ceppo genetico. I risultati ottenuti dimostrano in maniera univoca il coinvolgimento di FLO11 nei fenomeni dell’adesione cellulare e il suo ruolo determinante nella formazione di biofilm su superficie liquida. Pinna Claudia 125 Studio dell’aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces cerevisiae Tesi di Dottorato in Biotecnologie Microbiche Agroalimentari Università degli Studi di Sassari
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UNIONE EUROPEA Fondo Sociale Europe
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La Biodiversità dei ceppi flor La
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utilizzata per caratterizzare la mi
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Il vino nuovo viene conservato in b
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I meccanismi di adesione cellulare
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Il fenomeno di adesione è controll
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Entrambe le sequenze contengono una
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I lieviti flor, appartenenti alla s
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Il sequenziamento del promotore del
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Caratterizzazione tecnologica Forma
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