Studio dell'aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces ...

Test fenotipici per valutare le capacità adesive dei ceppi
flor
Prova idrofobicità con ottano (Reynolds & Fink, 2001)
La prova è stata condotta utilizzando due terreni colturali liquidi: terreno di
florizzazione e terreno SC. Le cellule coltivate overnight su SC liquido (20
ml) in agitazione a 30 °C sono state centrifugate (3000 rpm per 5 minuti),
sottoposte a lavaggio con acqua sterile per eliminare i residui di terreno e
risospese in terreno colturale. I campioni con una OD600 pari a 1 sono
stati risospesi in terreno di florizzazione e incubati in statico a 25 °C per 48
ore per consentire la formazione del biofilm. Nella prova su SC, i campioni
sono stati risospesi su SC allo 0,1% di glucosio e il periodo di incubazione
è stato di 3 ore a 25 °C. Successivamente, 1,2 ml di ciascun ceppo sono
stati trasferiti in un nuovo tubo di saggio nel quale sono stati aggiunti 0,6
ml di ottano (Sigma, Milano). Il sistema bifasico è stato vortexato per 3
minuti. Dopo 5 minuti circa, necessari per consentire la separazione delle
due fasi, due aliquote della fase acquosa (0,5 ml ciascuna) sono state
prelevate, trasferite in cuvette e sottoposte a lettura spettrofotometrica
(Biophotometer Eppendorf, Milano). La percentuale di cellule legate
all’ottano è stata calcolata indirettamente misurando la densità ottica della
fase acquosa a 600 nm, con la seguente formula:
%IDROFOBICITÀ= (1- A1/A0) x 100
A1 : media delle letture della fase liquida (OD 600)
A0 : OD 600 del campione tal quale (dopo la florizzazione o su SC).
Ogni prova è stata condotta in triplo a partire dalla stessa precoltura.
Pinna Claudia
Studio dell’aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces cerevisiae
Tesi di Dottorato in Biotecnologie Microbiche Agroalimentari
Università degli Studi di Sassari
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