Studio dell'aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces ...

3,1 (M23), 3,5 (V23) e 4,6 (A9) kb, sono state clonate nel vettore di
espressione pYES 2.1 sotto il controllo del promotore inducibile GAL1. I
plasmidi ottenuti sono stati utilizzati per trasformare il ceppo BY4742.
Sono stati così ottenuti i trasformanti BY-M23+, BY-V23+, BY-A9+. Questi
trasformanti sono in grado di esprimere i differenti alleli di FLO11 in terreni
contenenti galattosio come unica fonte di carbonio e di silenziarli in terreni
contenenti glucosio.
I trasformanti sono stati sottoposti all’analisi dei fenotipi correlanti con
l’espressione di FLO11. Per tutti gli esperimenti si è deciso di utilizzare
come controllo negativo di espressione i ceppi in crescita su glucosio.
Tutti i test sono stati effettuati in triplo.
Analisi fenotipiche dei trasformanti
Idrofobicità
La misura dell’idrofobicità dei trasformanti e del ceppo parentale BY4742 è
stata ottenuta determinando per via spettrofotometrica la percentuale di
cellule che si legano all’ottano come indicato da Reynolds and Fink
(2001). Nel terreno impiegato per la prova (SC-URA), il galattosio ha
sostituito il glucosio per consentire l’induzione di FLO11. Nei ceppi BY-
M23+, BY-V23+ e BY-A9+ si è assistito a un raddoppio dei valori di
idrofobicità (39%) rispetto ai risultati ottenuti per il ceppo parentale
(18,5%) (fig.43). Tuttavia, non sono state rilevate differenze significative
tra i trasformanti che esprimono alleli di differente lunghezza. Quando
coltivati su glucosio (controllo negativo) gli stessi ceppi non hanno
mostrato alcuna variazione di idrofobicità della superficie cellulare rispetto
al ceppo parentale BY4742.
50%
40%
30%
20%
10%
Pinna Claudia
88
Studio dell’aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces cerevisiae
0%
Tesi di Dottorato in Biotecnologie Microbiche Agroalimentari
BY4742 BY-M23+ BY-V23+ BY-A9+
Università degli Studi di Sassari