Studio dell'aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces ...

Studio dei fenotipi adesivi FLO11-dipendenti in un ceppo
genetico
In questo lavoro, per determinare le conseguenze funzionali dovute alla
variazione di dimensione di FLO11, sono stati confrontati gli effetti di tre
alleli di diversa dimensione derivati da ceppi flor naturali. Nel ceppo di
laboratorio BY4742 derivato da S288c, tutti i geni FLO sono
trascrizionalmente silenti (Liu et al., 1996; Verstrepen et al., 2004
Purevdorj-Gage et al., 2007). Il gene FLO11 è inattivo a causa di una
mutazione a carico del suo principale attivatore trascrizionale Flo8p
(Gancedo, 2001) e ciò lo rende incapace di formare aggregati cellulari, di
aderire alle superfici solide (Reynolds and Fink, 2001), e di formare
pseudoife (Gimeno et al., 1992). Perciò si è proceduto con l’espressione
ectopica delle tre varianti del gene FLO11 (derivate dai ceppi flor naturali
M23, V23 e A9) sotto il controllo del promotore GAL1, per valutare il
contributo di ogni allele a ciascuno dei fenotipi analizzati. Nel trasformante
BY-M23+ le zone ripetute misurano 900 bp mentre nei ceppi BY-V23+ e
BY-A9+ sono lunghe rispettivamente 1500 e 2600 bp. Le tre ORF sono
controllate dallo stesso promotore inducibile: si può perciò supporre che i
livelli di espressione siano uguali nei tre trasformanti.
Idrofobicità
Recentemente alcuni autori hanno dimostrato che l’espressione di FLO11
incrementa l’idrofobicità della superficie cellulare nei lieviti flor (Fidalgo et
al. 2006). Anche nel ceppo di laboratorio Σ1278b è noto che questo
carattere è ampiamente dipendente dal gene FLO11 (Reynolds and Fink,
2001). L’assenza della proteina Flo11p comporta nei lieviti, una drastica
riduzione dell’affinità nei confronti dei solventi idrofobici, mentre una sua
overespressione ne causa un aumento (Ishigami et al., 2004). In questo
studio è stato dimostrato che un’espressione ectopica di FLO11 in un
ceppo di laboratorio che normalmente mostra un carattere idrofilico
(Purevdorj-Gage et al., 2007), è responsabile dell’incremento di
idrofobicità della superficie cellulare. Tuttavia, sebbene l’esperimento sia
Pinna Claudia
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Studio dell’aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces cerevisiae
Tesi di Dottorato in Biotecnologie Microbiche Agroalimentari
Università degli Studi di Sassari