Studio dell'aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces ...

et al., 2006), dimostra che la delezione riguarda la stessa regione del
promotore.
Studio dei fenotipi adesivi FLO11-dipendenti in un ceppo
genetico
Scelta del ceppo genetico BY4742
L'obiettivo di questa parte della ricerca era acquisire nuove conoscenze
sull’impatto del polimorfismo di lunghezza di FLO11 nella produzione di
differenti tipologie di biofilm in Saccharomyces cerevisiae. Per la
realizzazione di questo lavoro si è deciso di utilizzare il ceppo BY4742
come ospite per l’espressione dei tre differenti alleli di FLO11. BY4742
oltre a derivare dal ceppo S288c il cui genoma è stato interamente
sequenziato (www.yeastgenome.org), presenta livelli endogeni dei
trascritti di FLO11 irrilevanti e non presenta alcuno dei fenotipi legati
all’adesione cellulare (Liu et al., 1996; Verstrepen et al., 2004; Purevdorj-
Gage et al., 2007). La ragione di questo deficit funzionale è da imputare a
una mutazione puntiforme a carico del gene FLO8 in posizione 608
(laddove una adenina è sostituita da una guanina). FLO8 codifica il fattore
di trascrizione Flo8p, che agisce a valle della PKA promuovendo
l’espressione di FLO11. Perciò una sovraespressione di FLO11, realizzata
con il vettore di espressione pYES 2.1, dovrebbe conferire al ceppo
proprietà adesive e la capacità di formare biofilm su superfici liquide.
Scelta degli alleli di FLO11 da clonare in BY4742
Verstrepen et al. (2005) hanno dimostrato che variazioni nel numero delle
sequenze ripetute intrageniche di FLO1 generano variabilità funzionale a
carico della parete cellulare. Per comprendere se tale meccanismo
potesse riguardare anche il gene FLO11 sono stati scelti tre ceppi flor di
S. cerevisiae (M23, V23 e A9) testati nella prima parte del lavoro per i
caratteri tecnologici. Questi tre ceppi presentano differenti capacità
adesive e si distinguono per la dimensione del gene FLO11. Le tre ORF di
Pinna Claudia
Studio dell’aggregazione cellulare in ceppi vinari di Saccharomyces cerevisiae
Tesi di Dottorato in Biotecnologie Microbiche Agroalimentari
Università degli Studi di Sassari
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