(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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동일한 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 혼성화되는 폴리뉴클레오티드, 또는 전술한 폴리뉴클레오
티드 중에서 하나에 의해 인코딩된 폴리펩티드를 포함한다.
구(句) "높은 엄밀도 혼성화 조건"은 프로브가 전형적으로, 핵산의 복합 혼합물 내에서 표적 하위서열에 혼성화
되지만 다른 서열에는 혼성화되지 않는 조건을 지칭한다. 높은 엄밀도 조건은 서열 의존성이고, 그리고 상이한
환경에서 달라질 것이다. 더욱 긴 서열은 특히, 더욱 높은 온도에서 혼성화된다. 핵산의 혼성화에 대한 광범위
한 보도는 Tijssen, Techniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic
Probes, "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays" (1993)에서
확인된다. 일반적으로, 높은 엄밀도 조건은 정의된 이온 강도 pH에서 특정 서열에 대한 열용융점(Tm)보다 대략
5-10℃ 낮게 선택된다. Tm은 표적에 상보적인 프로브의 50%가 평형에서 표적 서열에 혼성화되는 온도(정의된 이
온 강도, pH, 그리고 핵 농도 하에)이다(표적 서열이 Tm에서 과량으로 존재하기 때문에, 평형에서 프로브 중에
서 50%가 점유된다). 높은 엄밀도 조건은 염 농도가 pH 7.0 내지 8.3에서 대략 1.0 M 이하 나트륨 이온, 전형적
으로 대략 0.01 내지 1.0 M 나트륨 이온 농도(또는 다른 염)이고, 그리고 온도가 짧은 프로브(가령, 10개 내지
50개 뉴클레오티드)의 경우에 적어도 대략 30℃ 및 긴 프로브(가령, 50개 초과의 뉴클레오티드)의 경우에 적어
도 대략 60℃인 조건일 것이다. 높은 엄밀도 조건은 또한, 불안정화제(destabilizing agent), 예를 들면, 포름
아미드의 첨가로 달성될 수 있다. 선택성 또는 특이적 혼성화를 위하여, 양성 신호는 배경 혼성화의 적어도
2배, 선택적으로 배경 혼성화의 10배이다. 전형적인 높은 엄밀도 혼성화 조건은 아래와 같을 수 있다: 50% 포름
아미드, 5×SSC, 그리고 1% SDS, 42℃에서 항온처리, 또는, 5×SSC, 1% SDS, 65℃에서 항온처리, 그리고 65℃
에서 0.2×SSC, 그리고 0.1% SDS에서 세척. 이런 혼성화와 세척 단계는 예로써, 1, 2, 5, 10, 15, 30, 60분;
또는 그 이상 동안 수행될 수 있다.
높은 엄밀도 조건 하에 서로 혼성화되지 않는 핵산은 이들이 인코딩하는 폴리펩티드가 실질적으로 관련되면, 여
전히 실질적으로 관련된다. 이는 예로써, 핵산의 사본이 유전자 코드에 의해 허용되는 최대 코돈 축중성을 이용
하여 산출될 때 발생한다. 이런 경우에, 이들 핵산은 전형적으로, 중간 엄밀도 혼성화 조건 하에 혼성화된다.
예시적인 "중간 엄밀도 혼성화 조건"에는 37℃에서 40% 포름아미드, 1 M NaCl, 1% SDS의 완충액에서 혼성화, 그
리고 45℃에서 1×SSC에서 세척이 포함된다. 이런 혼성화와 세척 단계는 예로써, 1, 2, 5, 10, 15, 30, 60분,
또는 그 이상 동안 수행될 수 있다. 양성 혼성화는 배경의 적어도 2배이다. 당업자는 유사한 엄밀도의 조건을
제공하기 위하여 대안적 혼성화와 세척 조건이 이용될 수 있음을 용이하게 인지할 것이다.
중쇄와 경쇄 폴리펩티드와 폴리뉴클레오티드의 전형적인 구체예
본 섹션에서는 중쇄와 경쇄 폴리펩티드, 그리고 이런 폴리펩티드를 인코딩하는 예시적인 폴리뉴클레오티드의 예
시적인 구체예를 열거한다. 이들 예시적인 폴리뉴클레오티드는 개시된 피치아(Pichia) 발현 시스템에서 발현에
적합하다.
일정한 구체예에서, 본 발명은 본 출원에서 열거되거나, 또는 본 출원에서 열거된 폴리펩티드를 인코딩하는 폴
리뉴클레오티드, 또는 낮은-엄밀도 조건, 중간-엄밀도 조건, 또는 높은-엄밀도 조건 하에 상기 폴리뉴클레오티
드에 혼성화되는 폴리뉴클레오티드에 적어도 70%, 예를 들면, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도
90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적
어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드, 바람직하게는 IL-6 폴리펩티드에 특이적 결합이 포함되
지만 이에 국한되지 않는 본 명세서에 열거된 생물학적 활성 중에서 적어도 한 가지를 갖는 폴리펩티드(가령 면
역글로불린 중쇄와 경쇄, 단일-쇄 항체, 항체 단편 등)를 인코딩하는 것들을 포함한다. 또 다른 측면에서, 본
발명은 이런 폴리뉴클레오티드 및/또는 이런 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩되는 폴리펩티드를 포함하는 조성
물을 포함한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-6과 연관되거나, 또는 IL-6 길항제, 예를 들면, Ab1로 예방,
치료 또는 개선될 수 있는 질환 또는 이상(가령, 악액질, 암 피로, 관절염 등)의 치료 방법을 포함하고, 상기
방법은 이런 폴리뉴클레오티드 및/또는 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
일정한 바람직한 구체예에서, 중쇄 폴리펩티드는 도 2와 34-37 또는 표 1에 묘사되고, 그리고 본 명세서에서 열
거된 중쇄와 경쇄 폴리펩티드 서열 내에 포함된 것들을 비롯하여, 본 명세서에서 열거된 중쇄 및/또는 경쇄 폴
리펩티드의 하나 이상의 CDR 서열(본 명세서에서 열거된 중쇄와 경쇄 폴리펩티드 내에 포함된 것들 포함) 및 본
명세서에서 열거된 하나 이상의 골격 영역 폴리펩티드를 포함할 것이다. 일정한 바람직한 구체예에서, 중쇄 폴
리펩티드는 도 2와 34-37 또는 표 1에서 묘사된 바와 같은, 또는 본 명세서에서 열거된 중쇄 또는 경쇄 폴리펩
티드 내에 포함된 바와 같은 하나 이상의 골격 4 영역 서열을 포함할 것이다.
공개특허 10-2011-0091780
일정한 바람직한 구체예에서, 경쇄 폴리펩티드는 도 2와 34-37 또는 표 1에 묘사되고, 그리고 본 명세서에서 열
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