(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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(Ascobotryozyma) 속; 시테로마이세스(Citeromyces) 속; 데바리오마이세스(Debaryomyces) 속; 덱케라(Dekkera)
속; 에레모세시움(Eremothecium) 속; 이사첸키아(Issatchenkia) 속; 카자크스타니아(Kazachstania) 속; 클루이
베로마이세스(Kluyveromyces) 속; 코다메아(Kodamaea) 속; 로드데로마이세스(Lodderomyces) 속; 파치솔렌
(Pachysolen) 속; 피치아(Pichia) 속; 사카로마이세스(Saccharomyces) 속; 사투르니스포라(Saturnispora) 속;
테트라피시스포라(Tetrapisispora) 속; 토룰라스포라(Torulaspora) 속; 윌리오프시스(Williopsis) 속; 그리고
지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) 속을 비롯한 효모균(Saccharomycetaceae) 과(科)의 구성원이다. 본 발
명에 잠재적으로 유용한 다른 유형의 효모에는 야로위아(Yarrowia), 로도스포리듐(Rhodosporidium), 칸디다
(Candida), 한세눌라(Hansenula), 필로바슘(Filobasium), 필로바시델라(Filobasidellla), 스포리디오볼루스
(Sporidiobolus), 불레라(Bullera), 류코스포리듐(Leucosporidium)과 필로바시델라(Filobasidella)가
포함된다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 교배 적격성 효모는 피치아(Pichia) 속의 구성원이다. 본 발명의 더욱 바람직
한 구체예에서, 피치아(Pichia) 속의 교배 적격성 효모는 아래의 종: 피치아 파스토리스(Pichia pastoris), 피
치아 메타놀리카(Pichia methanolica), 그리고 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha)(Pichia angusta)
중에서 한 가지이다. 본 발명의 특히 바람직한 구체예에서, 피치아(Pichia) 속의 교배 적격성 효모는 피치아 파
스토리스(Pichia pastoris) 종이다.
반수체 효모 세포: 정상적인 게놈(염색체) 보체의 각 유전자의 단일 사본을 보유하는 세포.
배수체 효모 세포: 정상적인 게놈(염색체) 보체의 하나 이상의 사본을 보유하는 세포.
2배체 효모 세포: 전형적으로, 2개의 반수체 세포의 융합(교배) 과정에 의해 형성되는, 정상적인 게놈 보체의
본질적으로 모든 유전자의 2개 사본(대립유전자)을 보유하는 세포.
4배체 효모 세포: 전형적으로, 2개의 반수체 세포의 융합(교배) 과정에 의해 형성되는, 정상적인 게놈 보체의
본질적으로 모든 유전자의 4개 사본(대립유전자)을 보유하는 세포. 4배체는 2개, 3개, 4개, 또는 그 이상의 상
이한 발현 카세트를 보유할 수 있다. 이런 4배체는 선택성 교배 동형접합성 자웅이주 a/a와 알파/알파 2배체에
의해 사카로마이세스 세레비지애(S. cerevisiae)에서, 그리고 영양요구성 2배체를 획득하는 반수체의 순차적 교
배에 의해 피치아(Pichia)에서 획득될 수도 있다. 가령, [met his] 반수체는 2배체 [his]를 획득하기 위하여
[ade his] 반수체와 교배될 수 있다; 그리고 [met arg] 반수체는 2배체 [arg]를 획득하기 위하여 [ade arg] 반
수체와 교배될 수 있다; 이후, 이들 2배체 [his] x 2배체 [arg]로 4배체 독립영양체가 획득된다. 당업자가 인지
하는 바와 같이, 2배체 세포의 이익과 효용에 대한 지시는 4배체 세포에도 적용될 수 있다.
효모 교배: 2개의 반수체 효모 세포가 자연적으로 융합하여 1개의 2배체 효모 세포를 형성하는 과정.
감수분열: 2배체 효모 세포가 감소성 분열을 겪고 4개의 반수체 포자 산물을 형성하는 과정. 각 포자는 이후,
발아하고 반수체 무성적 성장 세포주를 형성한다.
선별가능 마커: 선별가능 마커는 예로써, 형질전환 현상을 통하여, 상기 유전자를 수용하는 세포 상에 성장 표
현형(물리적 성장 특징)을 공여하는 유전자 또는 유전자 단편이다. 선별가능 마커는 이러한 선별가능 마커 유전
자를 수용하지 못한 세포가 성장할 수 없는 조건 하에, 상기 세포가 선택성 성장 배지 내에서 생존하고 성장할
수 있도록 한다. 선별가능 마커 유전자는 일반적으로, 양성 선별가능 마커 유전자, 예를 들면, 2개의 ts 돌연변
이체가 교배되거나, 또는 하나의 ts 돌연변이체가 형질전환될 때 항생제 또는 다른 약물, 온도에 대한 내성을
세포에 공여하는 유전자; 음성 선별가능 마커 유전자, 예를 들면, 생합성 유전자를 보유하지 못한 모든 세포에
의해 요구되는 특정 영양소 없이 배지 내에서 성장하는 능력을 세포에 공여하는 생합성 유전자, 또는 야생형 유
전자를 보유하지 못한 세포에 의한 성장 무능력을 세포에 공여하는 돌연변이된 생합성 유전자; 등을 비롯한 여
러 유형으로 나눠진다. 적절한 마커에는 ZEO; G418; LYS3; MET1; MET3a; ADE1; ADE3; URA3; 등이 포함되지만
이들에 국한되지 않는다.
공개특허 10-2011-0091780
발현 벡터: 이들 DNA 벡터는 표적 숙주 세포 내에서 외래 단백질의 발현을 위한 조작을 용이하게 하는 요소를
포함한다. 편의하게, 서열의 조작 및 형질전환을 위한 DNA의 생산은 먼저, 세균 숙주, 예를 들면, 대장균(E.
coli)에서 수행되고, 그리고 통상적으로, 벡터는 세균 복제 기점 및 적절한 세균 선별 마커를 비롯하여, 이런
조작을 용이하게 하는 서열을 포함할 것이다. 선별 마커는 선택성 배양 배지에서 성장된 형질전환된 숙주 세포
의 생존 또는 성장에 필요한 단백질을 인코딩한다. 선별 유전자를 포함하는 벡터로 형질전환되지 않은 숙주 세
포는 배양 배지에서 생존하지 못할 것이다. 전형적인 선별 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소에 내성을 공여
하고, (b) 영양요구성 결핍을 보완하고, 또는 (c) 복합 배지로부터 가용하지 않은 핵심 영양소를 공급하는 단백
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