(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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방법은 적어도 1회의 색층분석 농축 단계 및 적어도 1회의 분석 농축 단계를 포함한다.
크기 또는 밀도로 세포 집단을 "농축하는" 방법은 당분야에 공지되어 있다(참조: U.S. 특허 5,627,052). 이들
단계는 항원-특이성으로 세포 집단을 농축하는 것에 추가하여, 본 발명의 방법에 이용될 수 있다.
본 발명의 세포 집단은 항원을 인식할 수 있는 적어도 하나의 세포를 포함한다. 항원-인식 세포에는 B 세포, 플
라스마 세포, 그리고 이들의 자손이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 한 구체예에서, 본 발명에서는 단일
유형의 항원-특이적 B-세포를 포함하는 클론 세포 집단을 제시한다, 다시 말하면, 이러한 세포 집단은 원하는
항원에 특이적인 단일 단일클론 항체를 생산한다.
이런 구체예에서, B 세포의 클론 항원-특이적 집단은 본 명세서에서 제공된 신규한 배양과 선별 프로토콜에 의
해 획득되는 항원-특이적, 항체-분비 세포로 주로 구성되는 것으로 생각된다. 따라서 본 발명에서는 또한, 적어
도 하나의 항원-특이적, 항체-분비 세포를 포함하는 농축된 세포 집단을 획득하기 위한 방법을 제시한다. 한 구
체예에서, 본 발명에서는 대략 50% 내지 대략 100%, 또는 그 내에 증분, 또는 대략 60%, 70%, 80%, 90% 이상,
또는 100%의 항원-특이적, 항체-분비 세포를 포함하는 농축된 세포 집단을 제시한다.
한 구체예에서, 본 발명에서는 예로써, 세포 집단으로부터 특정 B 세포를 선별하고 및/또는 특정 세포에 의해
생산된 항체를 선별하는 임의의 선별 단계 이전에, 숙주로부터 획득된 세포 집단을 농축함으로써 단일 B 세포를
분리하는 방법을 제시한다. 농축 단계는 1, 2, 3 또는 그 이상의 단계에서 수행될 수 있다.
한 구체예에서, 단일 B 세포는 단일 B 세포가 항원-특이성 및/또는 원하는 특성을 갖는 항체를 분비하는 지를
확증하기에 앞서, 농축된 세포 집단으로부터 분리된다.
한 구체예에서, 세포 집단을 농축하는 방법은 항체 생산 및/또는 선별을 위한 방법에 이용된다. 따라서 본 발명
에서는 항체를 선별하기에 앞서 세포 집단을 농축하는 단계를 포함하는 방법을 제시한다. 상기 방법은 아래의
단계를 포함할 수 있다: 적어도 하나의 항원-특이적 세포를 포함하는 세포 집단을 준비하는 단계, 적어도 하나
의 항원-특이적 세포를 분리함으로써 세포 집단을 농축하여 농축된 세포 집단을 형성하는 단계, 그리고 적어도
하나의 항원-특이적 세포로부터 항체 생산을 유도하는 단계. 바람직한 구체예에서, 농축된 세포 집단은 한 가지
이상의 항원-특이적 세포를 포함한다. 한 구체예에서, 농축된 집단의 각 항원-특이적 세포는 이들로부터 항체
생산 세포를 분리하고 및/또는 상기 B 세포를 이용하여 항체를 생산하거나, 또는 이런 항체에 상응하는 핵산 서
열을 생산하기에 앞서, 클론 항원-특이적 B 세포 집단을 산출하는 조건 하에 배양된다. 항체가 항원-특이적 세
포의 낮은 빈도로 세포 집단으로부터 생산되는 이전 기술과 대조적으로, 본 발명은 항원-특이적 세포의 높은 빈
도에서 항체 선별을 가능하게 한다. 농축 단계가 항체 선별 이전에 이용되기 때문에, 항체 생산에 이용되는 대
다수의 세포, 바람직하게는 실질적으로 모든 세포가 항원-특이적이다. 항원 특이성의 증가된 빈도로 세포 집단
으로부터 항체를 생산함으로써, 항체의 양과 다양성이 증가된다.
본 발명의 항체 선별 방법에서, 항체는 바람직하게는, 항원-특이적 B 세포의 클론 집단을 발생시키는 농축 단계
와 배양 단계 이후에 선별된다. 이들 방법은 하나 이상의 분리된, 항원-특이적 세포로부터 선별된 항체 또는 이
의 일부분을 염기서열분석하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 염기서열분석을 위한 당분야에 공지된 임의의 방
법이 이용될 수 있고, 중쇄, 경쇄, 가변 영역(들), 및/또는 상보성 결정 영역(들)(CDR)을 염기서열분석하는 단
계를 포함할 수 있다.
농축 단계에 더하여, 항체 선별을 위한 방법은 또한, 항원 인식 및/또는 항체 기능성에 대하여 세포 집단을 스
크리닝하는 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다. 가령, 원하는 항체는 특정한 구조 특징, 예를 들면, 특정 구조
의 특정 에피토프 또는 의태(mimicry)에 결합; 길항제 또는 작동약 활성; 또는 중화 활성, 예를 들면, 항원과
리간드 사이에 결합 저해를 보유할 수 있다. 한 구체예에서, 항체 기능성 스크리닝은 리간드-의존성이다. 항체
기능성에 대한 스크리닝에는 항원 리간드의 재조합 수용체 단백질과의 자연적인 상호작용을 되살리는 시험관내
단백질-단백질 상호작용 분석; 그리고 리간드 의존성이고 용이하게 모니터되는 세포-기초된 반응(가령, 증식반
응)이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 한 구체예에서, 항체 선별을 위한 방법은 저해 농도(IC50)를 측정함
으로써 항체 기능성에 대하여 세포 집단을 스크리닝하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 적어도 하나의 분리
된, 항원-특이적 세포는 대략 100, 50, 30, 25, 10 ㎍/㎖ 이하, 또는 그 내에 증분의 IC50을 갖는 항체를 생산
한다.
공개특허 10-2011-0091780
농축 단계에 더하여, 항체 선별을 위한 방법은 또한, 항체 결합 강도에 대하여 세포 집단을 스크리닝하는 하나
이상의 단계를 포함할 수 있다. 항체 결합 강도는 당분야에 공지된 임의의 방법(가령, Biacore)에 의해 측정
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