(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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형식의 항원(비오틴화되고 직접적인 코팅)을 인식하는 IgG, 고정화에 상관없이 검출가능 IgG와 항원 인식, 그리
고 IgG 생산 단독. IgG 생산은 항원-특이성과 고도로 상관되었다.
항체를 포함하는 상층액은 선택적으로 수집되고, 이는 앞서 기술된 단계에 따른 항체 선별을 위하여 농축되고,
스크리닝되고, 및/또는 배양될 수 있다. 한 구체예에서, 상층액은 농축되고(바람직하게는, 항원-특이성 분석,
특히 ELISA 분석에 의해) 및/또는 항체 기능성에 대하여 스크리닝된다.
다른 구체예에서, 원하는 분비된 단일클론 항체의 존재를 검출하기 위하여 앞서 기술된 상층액이 선택적으로 스
크리닝되는 농축된, 바람직하게는 클론성, 항원-특이적 B 세포 집단은 소수의 B 세포, 바람직하게는 단일 B 세
포의 분리에 이용되고, 이는 이후, 클론 B 세포 집단 내에서 단일 항체-생산 B 세포의 존재를 확증하기 위하여
적절한 분석법으로 조사된다. 한 구체예에서 대략 1개 내지 대략 20개의 세포, 바람직하게는 대략 15, 12, 10,
5, 또는 3개 이하, 또는 그 내에 증분의 세포, 가장 바람직하게는 단일 세포가 클론 B 세포 집단으로부터 분리
된다. 스크리닝은 바람직하게는, 항원-특이성 분석, 특히 할로 분석에 의해 달성된다. 할로 분석은 전장
단백질, 또는 이의 단편으로 수행될 수 있다. 항체-포함 상층액은 또한, 항원 결합 친화성; 항원-리간드 결합의
작동 또는 길항, 특정한 표적 세포 유형의 증식의 유도 또는 저해; 표적 세포의 용해의 유도 또는 저해, 그리고
항원을 수반하는 생물학적 경로의 유도 또는 저해 중에서 적어도 하나에 대하여 스크리닝될 수 있다.
확인된 항원-특이적 세포는 원하는 단일클론 항체를 인코딩하는 상응하는 핵산 서열을 도출하는데 이용될 수 있
다(AluI 다이제스트는 웰마다 단일 단일클론 항체 유형만 생산된다는 것을 확증할 수 있다). 앞서 언급된 바와
같이, 이들 서열은 인간 약제에서 이용에 적합해지도록 예로써, 인간화에 의해 돌연변이될 수 있다.
앞서 언급된 바와 같이, 이러한 과정에 이용되는 농축된 B 세포 집단 역시 반복되거나 상이한 순서로 수행될 수
있는 앞서 기술된 단계에 따른 항체 선별을 위하여 더욱 농축되고, 스크리닝되고, 및/또는 배양될 수 있다. 바
람직한 구체예에서, 농축된, 바람직하게는 클론성, 항원-특이적 세포 집단의 적어도 하나의 세포는 분리되고,
배양되고, 그리고 항체 선별에 이용된다.
따라서 한 구체예에서, 본 발명에서는 아래의 단계를 포함하는 방법을 제시한다:
a. 면역화된 숙주로부터 세포 집단을 수확하여 수확된 세포 집단을 획득하는 단계;
b. 수확된 세포 집단으로부터 적어도 하나의 단일 세포 현탁액을 산출하는 단계;
c. 적어도 하나의 단일 세포 현탁액을 바람직하게는, 색층분석으로 농축하여 첫 번째 농축된 세포 집단을 형성
하는 단계;
d. 첫 번째 농축된 세포 집단을 바람직하게는, ELISA 분석으로 농축하여 두 번째 농축된 세포 집단을 형성하는
단계, 상기 세포 집단은 바람직하게는, 클론성이다, 다시 말하면, 이는 단일 유형의 항원-특이적 B 세포만을 포
함한다;
e. 두 번째 농축된 세포 집단을 바람직하게는, 할로 분석으로 농축하여 원하는 항원에 특이적인 항체를 생산하
는 단일 또는 소수의 세포를 포함하는 세 번째 농축된 세포 집단을 형성하는 단계; 그리고
f. 세 번째 농축된 세포 집단으로부터 분리된 항원-특이적 세포에 의해 생산된 항체를 선별하는 단계.
상기 방법은 수확된 세포 집단을 항체 결합 강도(친화성, 친화력) 및/또는 항체 기능성에 대하여 스크리닝하는
하나 이상의 단계를 추가로 포함할 수 있다. 적절한 스크리닝 단계에는 확인된 항원-특이적 B 세포에 의해 생산
된 항체가 최소 항원 결합 친화성을 갖는 항체를 생산하는 지의 여부; 상기 항체가 리간드에 대한 원하는 항원
의 결합을 작동하거나, 또는 길항하는 지의 여부; 상기 항체가 특이적 세포 유형의 증식을 유도하거나, 또는 저
해하는 지의 여부; 상기 항체가 표적 세포에 대한 세포용해 반응을 유도하거나, 또는 도출하는 지의 여부; 상기
항체가 특이적 에피토프에 결합하는 지의 여부; 그리고 상기 항체가 항원을 수반하는 특정한 생물학적 경로
(들)를 조절(저해 또는 작동)하는 지의 여부를 검출하는 분석 방법이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
유사하게, 상기 방법은 두 번째 농축된 세포 집단을 항체 결합 강도 및/또는 항체 기능성에 대하여 스크리닝하
는 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다.
공개특허 10-2011-0091780
상기 방법은 선별된 항체의 폴리펩티드 서열 또는 상응하는 핵산 서열을 염기서열분석하는 단계를 추가로 포함
할 수 있다. 상기 방법은 또한, 선별된 항체의 서열, 이의 단편, 또는 유전적으로 변형된 이형을 이용하여 재조
합 항체를 생산하는 단계를 포함한다. 원하는 특성을 유지시키기 위하여 항체 서열을 돌연변이시키는 방법은 당
업자에게 널리 공지되어 있고, 여기에는 인간화, 키메라화, 단일 쇄 항체의 생산이 포함된다; 이들 돌연변이 방
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