(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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된다.
5. 경쇄 인간화에 이용되는 인간 동족체에 대한 골격과 CDR 배열(FR1, FR2, FR3, CDR1 & CDR2)을 결정한다. 이
는 당분야에서 기술된 바와 같은 전통적인 배치(layout)를 이용한다. 골격과 CDR 영역의 배치를 유지하면서 토
끼 가변 경쇄 서열과 인간 동족체를 정렬한다.
실례: 도 2에서, RbtVL 서열은 인간 상동성 서열 L12A와 함께 정렬되고, 그리고 골격과 CDR 도메인이
표시된다.
6. 인간 상동성 경쇄 서열 CDR1과 CDR2 영역을 토끼 서열로부터 CDR1과 CDR2 서열로 대체한다. 토끼와 인간 CDR
서열 간에 길이 차이가 존재하면, 전체 토끼 CDR 서열 및 이들의 길이를 이용한다. 결과의 인간화된 항체의 특
이성, 친화성 및/또는 면역원성은 더욱 작은 또는 더욱 큰 서열 교환이 수행되거나, 또는 특정한 잔기(들)가 변
경되면, 변화되지 않는 것이 가능하고, 기술된 이들 교환이 성공적으로 이용되긴 했지만 다른 변화가 허용될 수
있는 가능성을 배제시키지 않는다.
실례: 도 2에서, 인간 상동성 가변 경쇄 L12A의 CDR1과 CDR2 아미노산 잔기는 RbtVL 토끼 항체 경쇄 서열로부
터 CDR1과 CDR2 아미노산 서열로 대체된다. 인간 L12A 골격 1, 2와 3은 변경되지 않는다. 결과의 인간화된 서열
은 하기에, 1번 내지 88번 잔기로부터 VLh로서 도시된다. 주의: L12A 인간 서열과 상이한 잔기만 밑줄로 표시되
고, 따라서 토끼-유래된 아미노산 잔기이다. 본 실례에서, 88개 잔기 중에서 8개만 인간 서열과 상이하다.
7. 단계 6에서 산출된 새로운 하이브리드 서열의 골격 3 다음에, 토끼 경쇄 항체 서열의 전체 CDR3을 부착한다.
CDR3 서열은 다양한 길이일 수 있지만, 전형적으로 9개 내지 15개 아미노산 잔기 길이를 갖는다. CDR3 영역 및
그 뒤에 오는 골격 4 영역의 시작은 당업자에 의해 고전적으로 정의되고 확인가능하다. 전형적으로, 골격 4의
시작, 그리고 따라서 CDR3의 끝 다음은 서열 'FGGG…'로 구성되지만, 이들 잔기에 일부 변이가 존재할 수 있다.
실례: 도 2에서, RbtVL의 CDR3(89번 내지 100번 아미노산 잔기)이 VLh로 표시된 인간화 서열 내에서 골격 3의
끝 다음에 추가된다.
8. 전형적으로, 가변 경쇄의 최종 11개 아미노산 잔기이고 상기 단계 7에서 지시된 바와 같이 시작되고 전형적
으로, 아미노산 서열 '…VVKR'로 끝나는 토끼 경쇄 골격 4는 일반적으로, 생식세포 서열로부터 최근접 인간 경
쇄 골격 4 동족체로 대체된다. 빈번하게, 인간 경쇄 골격 4는 서열 'FGGGTKVEIKR'을 보유한다. 최대 상동성이
아닌, 또는 달리 상이한 다른 인간 경쇄 골격 4 서열이 결과의 인간화된 항체의 특이성, 친화성 및/또는 면역원
성에 영향을 주지 않으면서 이용될 수 있다. 인간 경쇄 골격 4 서열은 상기 단계 7로부터 CDR3 서열 바로 다음
에, 가변 경쇄 인간화된 서열의 끝에 추가된다. 이는 가변 경쇄 인간화된 아미노산 서열의 끝이다.
실례: 도 2에서, RbtVL 토끼 경쇄 서열의 골격 4(FR4)는 상동성 인간 FR4 서열 위에 도시된다. 인간 FR4 서열
은 상기 단계 7에서 추가된 CD3 영역의 끝 바로 다음에, 인간화된 가변 경쇄 서열(VLh)에 추가된다.
중쇄
1. 신호 펩티드 서열 다음에 첫 번째 아미노산을 확인한다. 이는 골격 1의 시작이다. 토끼 중쇄 단백질 서열에
대한 신호 펩티드는 첫 번째 개시 메티오닌에서 시작되고 전형적으로, 19개 아미노산 길이를 갖는다. 항상 그러
한 것은 아니지만 전형적으로, 토끼 중쇄 신호 펩티드의 최종 3개의 아미노산 잔기는 '…VQC'이고, 그 다음에
골격 1의 시작이다. 성숙 폴리펩티드의 시작은 또한, N-말단 단백질 염기서열분석에 의해 경험적으로 결정되거
나, 또는 예측 알고리즘(prediction algorithm)을 이용하여 예측될 수 있다. 이는 또한, 당업자에 의해 고전적
으로 정의되는 골격 1의 시작이다
실례: 'QEQL…'로 시작되는 도 2에서 RbtVH 아미노산 잔기
2. 골격 3의 끝을 확인한다. 이는 전형적으로, 골격 1의 시작 다음에 95-100개 아미노산이고, 그리고 전형적으
로, '…CAR'(알라닌은 발린일 수도 있다)의 최종 서열을 보유한다. 이는 당업자에 의해 고전적으로 정의되는 골
격 3의 끝이다.
실례: '…FCVR'로 끝나는 도 2에서 RbtVH 아미노산 잔기 98
공개특허 10-2011-0091780
3. 앞서 정의된 바와 같은 골격 1의 시작에서부터 골격 3의 끝까지 폴리펩티드의 토끼 중쇄 서열을 이용하고 가
장 유사한 인간 항체 단백질 서열에 대한 서열 상동성 검색을 수행한다. 이는 전형적으로, 면역원성의 가능성을
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