(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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감소시키기 위하여 항체 성숙 이전에 인간 생식세포 서열의 데이터베이스에 대한 검색이긴 하지만, 임의의 인간
서열이 이용될 수 있다. 전형적으로, 서열 데이터베이스를 최대 상동성에 대하여 검색하는데 BLAST와 같은 프로
그램이 이용될 수 있다. 인간 항체 서열의 데이터베이스는 다양한 출처, 예를 들면, NCBI(National Center for
Biotechnology Information)로부터 확인될 수 있다.
실례: 도 2에서 1번 내지 98번 잔기로부터 RbtVH 아미노산 서열은 인간 항체 생식세포 데이터베이스에 대하여
BLAST된다. 상위 3개의 독특한 답변된 서열은 도 2에서 3-64-04, 3-66-04, 그리고 3-53-02로서 도시된다.
4. 일반적으로, 최대 상동성 인간 생식세포 가변 중쇄 서열은 이후, 인간화를 위한 기초로서 이용된다. 하지만,
당업자는 서열 갭 및 골격 유사성을 비롯한 다른 인자에 기초하여, 상동성 알고리즘에 의한 결정에서 최대 상동
성이 아닌 다른 서열의 이용을 결정할 수도 있다.
실례: 도 2에서 3-64-04는 최대 상동성 인간 생식세포 가변 중쇄 서열이고 RbtVH의 인간화를 위한 기초로서 이
용된다.
5. 중쇄 인간화에 이용되는 인간 동족체에 대한 골격과 CDR 배열(FR1, FR2, FR3, CDR1 & CDR2)을 결정한다. 이
는 당분야에서 기술된 바와 같은 전통적인 배치(layout)를 이용한다. 골격과 CDR 영역의 배치를 유지하면서 토
끼 가변 중쇄 서열과 인간 동족체를 정렬한다.
실례: 도 2에서, RbtVH 서열은 인간 상동성 서열 3-64-04와 함께 정렬되고, 그리고 골격과 CDR 도메인이 표시
된다.
6. 인간 상동성 중쇄 서열 CDR1과 CDR2 영역을 토끼 서열로부터 CDR1과 CDR2 서열로 대체한다. 토끼와 인간 CDR
서열 간에 길이 차이가 존재하면, 전체 토끼 CDR 서열 및 이들의 길이를 이용한다. 이에 더하여, 인간 중쇄 골
격 1 영역의 최종 3개의 아미노산을 토끼 중쇄 골격 1의 최종 3개의 아미노산으로 대체하는 것이 필요할 수도
있다. 항상 그러한 것은 아니지만 전형적으로, 토끼 중쇄 골격 1 내에서, 이들 3개의 잔기는 세린 잔기가 선행
하는 글리신 잔기 다음에 위치한다. 이에 더하여, 인간 중쇄 골격 2 영역의 최종 아미노산을 토끼 중쇄 골격 2
의 최종 아미노산으로 대체하는 것이 필요할 수도 있다. 항상 그러한 것은 아니지만 전형적으로, 이는 토끼 중
쇄 골격 2 내에서 이소류신 잔기가 선행하는 글리신 잔기이다. 결과의 인간화된 항체의 특이성, 친화성 및/또는
면역원성은 더욱 작은 또는 더욱 큰 서열 교환이 수행되거나, 또는 특정한 잔기(들)가 변경되면, 변화되지 않는
것이 가능하고, 기술된 이들 교환이 성공적으로 이용되긴 했지만 다른 변화가 허용될 수 있는 가능성을 배제시
키지 않는다. 가령, 트립토판 아미노산 잔기는 전형적으로, 토끼 중쇄 CDR2 영역의 끝에서부터 4개 잔기 앞에서
발생하는 반면, 인간 중쇄 CDR2 내에서 이러한 잔기는 전형적으로, 세린 잔기이다. 상기 위치에서 토끼 트립토
판 잔기의 인간 세린 잔기로의 변화는 인간화된 항체의 특이성 또는 친화성에 거의 또는 전혀 영향을 주지 않는
것으로 증명되었고, 따라서 인간화된 서열 내에서 토끼 서열-유래된 아미노산 잔기의 함량을 더욱 감소시킨다.
실례: 도 2에서, 인간 상동성 가변 중쇄의 CDR1과 CDR2 아미노산 잔기는 토끼 서열(63번 위치) 내에서 트립토
판 및 인간 서열 내에서 동일한 위치에서 세린이고, 그리고 인간 세린 잔기로서 유지되는 상자로 표시된 잔기를
제외하고, RbtVH 토끼 항체 경쇄 서열로부터 CDR1과 CDR2 아미노산 서열로 대체된다. 이들 CDR1과 CDR2 변화에
더하여, 골격 1의 최종 3개의 아미노산(위치 28-30) 및 골격 2의 최종 잔기(위치 49)는 인간이 아닌 토끼 아미
노산 잔기로서 유지된다. 결과의 인간화된 서열은 하기에, 1번 내지 98번 잔기로부터 VHh로서 도시된다. 주의:
3-64-04 인간 서열과 상이한 잔기만 밑줄로 표시되고, 따라서 토끼-유래된 아미노산 잔기이다. 본 실례에서, 98
개 잔기 중에서 15개만 인간 서열과 상이하다
7. 단계 6에서 산출된 새로운 하이브리드 서열의 골격 3 다음에, 토끼 중쇄 항체 서열의 전체 CDR3을 부착한다.
CDR3 서열은 다양한 길이일 수 있지만, 전형적으로 5개 내지 19개 아미노산 잔기 길이를 갖는다. CDR3 영역 및
그 뒤에 오는 골격 4 영역의 시작은 당업자에 의해 고전적으로 정의되고 확인가능하다. 전형적으로, 골격 4의
시작, 그리고 따라서 CDR3의 끝 다음은 서열 WGXG…(여기서 X는 일반적으로, Q 또는 P)로 구성되지만, 이들 잔
기에 일부 변이가 존재할 수 있다
실례: RbtVH의 CDR3(99번 내지 110번 아미노산 잔기)이 VHh로 표시된 인간화 서열 내에서 골격 3의 끝 다음에
추가된다.
공개특허 10-2011-0091780
8. 전형적으로, 가변 중쇄의 최종 11개 아미노산 잔기이고 상기 단계 7에서 지시된 바와 같이 시작되고 전형적
으로, 아미노산 서열 '…TVSS'로 끝나는 토끼 중쇄 골격 4는 일반적으로, 생식세포 서열로부터 최근접 인간 중
쇄 골격 4 동족체로 대체된다. 빈번하게, 인간 중쇄 골격 4는 서열 WGQGTLVTVSS'을 보유한다. 최대 상동성이 아
닌, 또는 달리 상이한 다른 인간 중쇄 골격 4 서열이 결과의 인간화된 항체의 특이성, 친화성 및/또는 면역원성
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