(UV) ve Görünür Bölge Moleküler Absorpsiyon Spektroskopisi

S›ra Sizde 7
Fosforesans ölçümlerinde numuneler s›v› azot s›cakl›-
¤›nda optikçe geçirgen bir kat› forma dönüflür. Bu
formda uyar›lm›fl triplet düzeydeki moleküllerin çözücü
ve di¤er moleküllerle çarp›flmalar› engellendi¤i için
fosforesans kuantum verimleri ciddi flekilde artar, bunun
sonunda da sistemin hassasiyeti artar. Bunu sa¤layabilmek
için numuneler s›v› azot s›cakl›¤›na kadar
so¤utulurlar.
S›ra Sizde 8
fiekil 4.2’deki Jablonski diyagram›na göre floresans veya
fosforesans ›fl›mas› s›ras›nda elektron, temel enerji
düzeyinin farkl› alt titreflimsel enerji düzeylerine dönebilir.
Farkl› titreflim sevilerine inen elektron için yay›lan
›fl›malar›n dalga boylar› da farkl›d›r. Bu nedenle elde
edilen lüminesans spektrumu belirli bir dalga boyu aral›¤›nda
gözlenir.
S›ra Sizde 9
Numune çözeltisinden 250 µL al›n›p 10 mL’ye seyreltildi¤i
için analiz edilen çözeltinin deriflimi afla¤›daki gibi
bulunur.
M1V1 = M2V2 250 µL x 250 µg mL-1 = M2 x 10000 µL
M2 = 6,25 µg mL-1 Floresans fliddeti ile askorbik asit deriflimi aras›ndaki
iliflki yard›m›yla okunan floresans fliddeti hesaplan›r.
Floresans fliddeti = 1,7576 x [Askorbik asit]
Floresans fliddeti = 1,7576 x 6,25
Floresans fliddeti = 10,985 olarak bulunur.
S›ra Sizde 10
Analiz esnas›nda 30 µL kan serumu numunesi 250 mL’ye
seyreltildi¤i için öncelikle 250 mL’deki albumin deriflimi
afla¤›daki gibi bulunur.
M1V1 = M2V2 250 mL = 250000 µL
30 µL x 22 g L-1 = M2 x 250000 µL
M2 = 2,64 x 10-3 g L-1 4. Ünite - Lüminesans Spektroskopisi
Birim dönüflümleri yap›ld›¤›nda,
109
M2 = 2,64 x 10-3 g L-1 = 2,64 x 10-3 mg mL-1 = 2,64 µg
mL-1 olarak bulunur.
Kalibrasyon grafi¤i denklemi yard›m›yla floresans fliddeti
afla¤›daki gibi bulunur.
Floresans fliddeti = -18,208 x [Albumin] + 72,515
Floresans fliddeti = -18,208 x 2,64 µg mL-1 + 72,515
Floresans fliddeti = 24,445
Kompleksin floresans fliddetindeki azalma miktar› ise
bafllangݍ floresans fliddetinden (74,4) hesaplanan de-
¤erin (24,445) ç›kar›lmas› ile bulunur.
Kompleksin floresans fliddetindeki azalma miktar›:
74,4 - 24,445 = 49,955 olur.
Yararlan›lan ve Baflvurulabilecek
Kaynaklar
Bauer, H. H., Christian, G. D., ve O’reilly, J. E. (1978).
Instrumental Analysis, Allyn and Bacon
Chemistry Series, USA.
Hargis, L. G. (1988). Analytical Chemistry Principles
And Techniques, Prentice-Hall, USA.
Harvey, D. (2000). Modern Analytical Chemistry,
McGraw-Hill Higher Education, USA
Li, D. H., Yang, H. H., Zhen, H., Fang, Y., Zhu, Q. Z. ve
Xu, J. G. (1999). Fluorimetric determination of
albumin and globulin in human serum using
tetra-substituted sulphonated aluminum
phthalocyanine. Anal. Chim. Acta, (401), 185-189.
Riva, B. S. V., Costa-Fernández, J. M., Pereiro, R. ve
Sanz-Medel, A. (2000). Fluorimetric method for
the determination of trace levels of mercury in
sea water using 6-mercaptopurine. Anal. Chim.
Acta, (419), 33-40.
Ruengsitagoon, W., Liawruangrath, S. ve Townshend,
A. (2006). Flow injection chemiluminescence
determination of paracetamol. Talanta, (69), 976-
983.
Skoog, D. A., Holler, F. J., Nieman, T. A., çeviri editörleri
K›l›ç, E., Köseo¤lu, F. ve Y›lmaz, H. (1998).
Enstrümental Analiz ‹lkeleri, Bilim Yay›nc›l›k,
Türkiye.