Aus der Arbeitsgruppe Immunologie der Tierärztlichen Hochschule ...

3.2.2.1 Puffer und Lösungen
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Alle Puffer und Lösungen wurden, wenn nicht anders angegeben, in Aqua dest. oder Aqua
tridest. angesetzt. Das Aqua dest. wurde aus einer Umkehrosmoseanlage (3.1) gewonnen. Die
Anlage verfügt über einen vorgeschalteten Aktivkohlefilter, eine Umkehrosmoseeinheit und
eine nachfolgende Aufbereitung über ein Ionenaustauscherharz. Das Aqua tridest. wurde in
einem nachgeschalteten Reinstwassersystem (3.1) hergestellt. Hierbei erfolgt die weitere
Aufbereitung des Wassers über Aktivkohlefilter, einen Flachbettionenaustauscher und eine
Ultrafiltration über eine Polysulfonhohlfasermembran, wobei insbesondere organische
Substanzen entfernt wurden.
3.2.2.2 Puffer und Lösungen für den RIA
Die Reagenzien für den Histamin-RIA sind als Testkit der Firma DLD, Hamburg, Nr.
RA601/100 erhältlich. Im folgenden werden die Puffer, Lösungen und Antikörper
beschrieben, wie sie im Testkit vorhanden sind, es sei denn, es wurden Veränderungen an den
Reagenzien vorgenommen oder sie wurden komplett in der hiesigen Arbeitsgruppe
hergestellt.
a) Release- Puffer
Statt des im Testkit vorhandenen Pipes-Puffer wurde zur Verdünnung der Histamin-Standards
der unter (3.2.2.3) beschriebene Freisetzungspuffer verwendet.
b) Histamin-Standards
Für diese Arbeit wurden die Histamin-Standards selbst hergestellt. Sie dienten zur Erstellung
einer Histamin-Standard-Reihe und enthielten Histamin in 0,1 N HCl in den folgenden
Konzentrationen: 100, 30, 10, 3, 1 und 0,3 ng/ml
0,1 N HCl: Aqua tridest 996,2 ml
+ Konz. HCl (ca. 37%) 3,8 ml
Von jedem Standard wurden 10 ml hergestellt. Dazu wurde Histamin als freie Base in
kristalliner Form auf der Analysenwaage abgewogen und in 0,1 N HCl gelöst. Die fertigen
Standards wurden in 1 ml Portionen bei –20°C gelagert, die jeweils im Gebrauch befindlichen
Portionen wurden bei 4°C aufbewahrt.