Aus der Arbeitsgruppe Immunologie der Tierärztlichen Hochschule ...

3.3 Methoden
3.3.1 Blutentnahme
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Die Blutproben wurden mit einem sterilen Vakutainersystem (3.2.1) nach einer
durchgeführten Desinfektion mit 70% Ethanol aus der gestauten Vena jugularis entnommen.
Je Tier wurde ein K-EDTA Röhrchen (15%, 0,12 ml) für die Versuchsdurchführung und ein
silikonisiertes Röhrchen ohne gerinnungshemmenden Zusatz für die Serumgewinnung gefüllt
(3.2.1).
3.3.2 Gewinnung von Serum
Nach der Blutentnahme wurden die Röhrchen bei Raumtemperatur bis zur vollständigen
Retraktion des Blutkuchens gelagert. Anschließend wurde das Koagulum mit einer
Pasteurpipette vom Rand gelöst und die Probe 10 min bei 2500 x g bei Raumtempertatur
zentrifugiert. Das Serum wurde abpipettiert und für spätere Untersuchungen bei –80°C
gelagert.
3.3.3 Gewinnung von gewaschenen Blutzellen
Hierfür wurde das EDTA-Blut verwendet, nachdem die Gesamtleukozytenzahl (3.3.4)
bestimmt und ein Blutausstrich (3.3.5) gefertigt wurde. Das Blut wurde in einem
Zentrifugenröhrchen (3.2.1) 1:5 mit PBS (3.2.2.3) verdünnt und bei Raumtemperatur für 10
min mit 400 x g ohne Bremse zentrifugiert. Der Überstand wurde mit einer weitlumigen
Pipette entfernt und verworfen. Das erntfernte Volumen wurde wieder mit PBS aufgefüllt, die
Probe resuspendiert und erneut unter den selben Bedingungen zentrifugiert. Danach wurde
wieder der Überstand abgenommen und verworfen, wobei darauf geachtet wurde, daß genau
das ursprüngliche Probenausgangsvolumen erreicht wurde. Danach wurde die Probe erneut
resuspendiert.