Comunicazioni orali e Poster sul Monitoraggio biologico - Giornale ...

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G Ital Med Lav Erg 2004; 26:4, Suppl COMUNICAZIONI ORALI E POSTER SUL MONITORAGGIO BIOLOGICO www.gimle.fsm.it 71 della sanità è risultata inferiore di circa la metà rispetto a quella dei donatori di sangue della popolazione italiana. È nostra opinione quindi che le misure preventive, già attuate tra il personale sanitario esposto a rischio biologico, siano state efficaci ed attente. Le 2 strategie adottate per evitare il contagio da epatite sono: la prevenzione generica, analoga a tutte le malattie a trasmissione parenterale e la prevenzione specifica, solo però nel caso dell’HBV, basata sull’immunizzazione attiva; purtroppo non esiste al momento alcun vaccino o immunoglobulina contro l’HCV (3). Quindi la prevenzione si basa sul controllo e sulla educazione sanitaria, sullo screening del sangue e dei suoi derivati nell’ambito della sorveglianza sanitaria effettuata dal medico competente e sulla immunoprofilassi nel caso del virus dell’epatite B, che si avvale di un efficace vaccino prodotto con DNA ricombinante. Lo schema vaccinale prevede la somministrazione di 1 ml di vaccino i.m. o sottocute (braccio, deltoide o coscia) ai tempi di 0, 1, 6 mesi. La risposta è considerata buona se il titolo anticorpale anti-HBsAg è maggiore di 100 UI/l; accettabile con titolo tra 100 e A. Lai, A. Gaiardo, A. Pulliero, E. Clonfero, S. Pavanello 10 UI/l; insufficiente se il titolo è inferiore a 10 UI/l. In tema di profilassi da epatite C è indispensabile eseguire test immunologici pretrasfusionali; va ricordato infatti che il test dell’anticorpo anti-HCV è stato reso obbligatorio su tutte le unità di sangue nei centri trasfusionali italiani fin dall’Agosto del 1990 (2). Bibliografia 1) Terrana T, L’Abbate N. Il lavoro degli operatori della sanità. In L. Ambrosi, V. Foà: Trattato di Medicina del Lavoro, UTET, Torino, 1996; pp 607-614 2) Okolicsanyi L, Nassuato G, R.M. Immolo R.M. Epatiti acute virali e danno epatico da farmaci. In L. Okolicsanyi, A. Pernacchia. Malattie dell’Apparato Gastrointestinale, McGraw-Hill, Milano, 1994; pp 253-267. 3) Sali D. I fattori di rischio microbiologici. In F. Gobba, D. Sali: Rischi professionali in ambito ospedaliero, McGraw-Hill, Milano, 1995; pp 13-41. Influenza della riduzione del nucleotide excision repair e del genotipo GSTM1 nullo sui livelli di addotti al DNA nei leucociti mononucleati in lavoratori di cokeria con elevate esposizioni ad idrocarburi policiclici aromatici Sezione di Medicina del Lavoro, Dipartimento di Medicina Ambientale e Sanità Pubblica, Università degli Studi di Padova RIASSUNTO. Abbiamo valutato l’influenza di quattro polimorfismi dei geni nucleotide excision repair (NER) e quella del glutatione S-transferasi µ 1 (GSTM1-attivo o nullo) sui livelli di addotti al DNA dell’anti-benzo[a]pirene diol epossido (BPDE) dalla frazione di linfociti e monociti (LMF) di 67 lavoratori di cokeria esposti ad elevati livelli di idrocarburi policiclici aromatici (PAH). I livelli di addotti al DNA anti-BPDE sono stati determinati tramite l’analisi HPLC/fluorescenza. I genotipi sono stati determinati tramite PCR sul DNA genomico di ogni soggetto. Abbiamo trovato che i livelli di addotti al DNA anti-BPDE nella LMF dei lavoratori della cokeria erano significatimente aumentati dalla bassa capacità di riparazione del DNA dei genotipi XPC-PAT+/+ e XPA-A23A. Inoltre, gli addotti al DNA sono fortemente influenzati dal genotipo GSTM1. La frequenza più elevata di lavoratori con genotipo NER sfavorevole XPC-PAT+/+ e XPA- A23A, solo o combinato con il genotipo GSTM1-nullo, apparteneva al terzile con il più alto livello di addotti, essendo XPC-PAT +/+ e XPA-A23A significativamente presenti in circa 2/3 dei soggetti. La minoranza di soggetti con il genotipo NER sfavorevole XPC-PAT +/+ e XPA- A23A insieme con GSTM1 nullo appartengono tutti ai due terzili più alti di addotti e nel 75% a quello più alto. L’analisi della regressione lineare multipla mostrava che i livelli di addotti al DNA anti-BPDE nella LMF erano significativamente correlati all’esposizione PAH, alla mancanza di attività di GSTM1 e alla bassa capacità di riparazione del DNA del genotipo XPC-PAT +/+. L’influenza del genotipo XPA-A23A non è stata evidenziata in questa analisi statistica e non è stata trovata nessuna associazione di polimorfismi XPD, abitudini alimentari e fumo di tabacco con gli addotti al DNA anti-BPDE. La modulazione degli addotti al DNA anti-BPDE nella frazione linfomonocitica da parte di GSTM1-nullo e di alcuni genotipi NER a bassa attività può essere considerata come potenziale fattore di suscettibilità genetica capace di modulare la risposta individuale all’esposizione genotossica a PAH e un conseguente rischio di cancro nei lavoratori di cokeria. Parole chiave: polimorfismo genetico, glutatione-S-transferasi µ1 (GSTM1), addotti al DNA, anti-benzo[a]pirene diol epossido (BPDE), idrocarburi policiclici aromatici, lavoratori di cokeria. ABSTRACT. EFFECT OF NUCLEOTIDE EXCISION REPAIR AND GSTM1 NULL POLYMORPHISMS ON THE LEVELS OF DNA ADDUCTS IN LYMPHOCYTES OF COKE-OVEN WORKERS HIGHLY EXPOSED TO PAH. We evaluated the influence of four polymorphisms of nucleotide excision repair (NER) genes and that of glutathione S-transferase µ 1 (GSTM1-active or -null) on antibenzo[a]pyrene diol epoxide (BPDE)-DNA adduct levels from the lymphocyte plus monocyte fraction (LMF) of 67 highly PAH (polycyclic aromatic hydrocarbons)-exposed coke oven workers. The bulky anti-BP- DE-DNA adduct levels were detected by HPLC/fluorescence analysis. Genotypes were determined by PCR on the genomic DNA of each subject. We found that anti-BPDE-DNA adduct levels in the LMF of coke oven workers were significantly increased by the low DNA repair capacity of XPC- PAT +/+ and XPA- A23A genotypes. Moreover, DNA adducts are strongly influenced by GSTM1 genotype. The higher frequencies of workers with unfavourable XPC- PAT +/+ and XPA- A23A NER genotypes, alone or combined with GSTM1-null genotype belonged to the tertile with the highest adduct level, XPC- PAT +/+ and XPA- A23A being significantly present in about two-thirds of the subjects. The few subjects with unfavourable XPC- PAT +/+ and XPA- A23A NER genotypes, together with GSTM1-null deletion, all belonged to the two higher adduct tertiles and in 75% to the highest one. Multiple linear regression analysis showed that anti-BPDE-DNA adduct levels in LMF were significantly related to PAH exposure, to the lack of GSTM1 activity and to the low DNA repair capacity of XPC- PAT +/+ genotype. The influence of the XPA-A23A genotype was not evident in this statistical analysis, and no association of XPD polymorphisms, dietary habits and tobacco smoking with anti-BP- DE-DNA adducts was found. The modulation of anti-BPDE-DNA adducts in the LMF by GSTM1-null and some low-activity NER genotypes may be considered as potential genetic susceptibility factors capable of modulating the individual response to PAH (BaP: benzo[a]pyrene) genotoxic exposure and a consequent risk of cancer in coke oven workers. Key words: genetic polymorphism, glutathione-S-transferase µ1 (GSTM1), DNA adducts, anti-benzo[a]pyrene diol epoxide (BPDE), polycyclic aromatic hydrocarbons, coke oven workers.
COMUNICAZIONI ORALI E POSTER SUL MONITORAGGIO BIOLOGICO G Ital Med Lav Erg 2004; 26:4, Suppl 72 www.gimle.fsm.it Introduzione Nell’uomo esiste una considerevole variabilità interindividuale in risposta all’esposizione a PAH genotossici e conseguente rischio di cancro. Gli addotti al DNA indotti dal BaP nei leucociti mononucleati possono essere considerati un marker non solo di esposizione genotossica a BaP ma anche delle capacità individuali di metabolizzarlo e di riparare il DNA. L’attivazione del BaP genera anti-BPDE, l’intermedio più reattivo; la reazione di detossificazione, catalizzata da GSTM1 può prevenire il suo legame al DNA, fase critica nel processo di cancerogenesi. Gli addotti al DNA possono essere rimossi dal meccanismo nucleotide excision repair (NER), uno dei vari processi di riparazione del DNA di cui recentemente sono stati identificati alcuni polimorfismi (1). Nel nostro studio abbiamo valutato l’influenza di quattro polimorfismi dei geni NER insieme con quello del GSTM1 sugli addotti al DNA anti-BPDE di lavoratori della cokeria esposti ad alti livelli di PAH. Materiali e metodi Da una popolazione di 95 soggetti è stato estratto un campione di 67 lavoratori maschi che presentavano un livello urinario post turno di 1-pirenolo superiore al BEI (2.28 µmoli/mol di creatinina). Per ogni soggetto sono state raccolte, mediante questionario, informazioni riguardo età, fumo di tabacco, consumo di carne cotta alla brace, esposizione occupazionale e ambientale a PAH e uso di pomate e shampoo a base di catrame. Sono stati raccolti campioni di urine (50 ml) e sangue (20 ml) alla fine del turno di lavoro dopo almeno tre giorni consecutivi di lavoro. I campioni di urine sono stati usati per la determinazione dell’1-pirenolo e i campioni di sangue per la genotipizzazione e la rilevazione degli addotti al DNA anti-BPDE tramite l’analisi HPLC/fluorescenza dell’anti-BPDE tetrol I-1 rilasciato dopo idrolisi acida dei campioni di DNA di linfomonociti (2). Dopo l’isolamento del DNA dalle cellule è stata valutata la presenza o assenza del gene GSTM1 tramite metodo PCR e sono stati determinati quattro polimorfismi NER con tecnica PCR-RFLP. L’analisi statistica tra i vari gruppi è stata eseguita usando il test non parametrico Mann-Whitney o il test Chi quadrato. L’analisi mediante regressione multipla è stata usata per stimare l’influenza dell’esposizione professionale a PAH, del GSTM1 e di quattro polimorfismi dei geni NER sui livelli di addotti al DNA anti-BPDE. Risultati e Discussione La Tabella I mostra le frequenze di GSTM1 attivo e nullo e i polimorfismi del gene NER con i relativi livelli di 1-pirenolo e di addotti al DNA anti-BPDE. Il genotipo GSTM1 nullo è strettamente associato alla formazione degli addotti. Inoltre, soggetti omozigoti per XPC-PAT +/+ e genotipo XPA-A23A mostravano un significativo incremento nei livelli di addotti rispetto a quelli con nessuna o solo 1 copia di questi polimorfismi. L’altro sottogruppo di lavoratori con la variante XPD-312Asn e XPD-751Gln presentava livelli di addotti al DNA più alti rispetto a quelli con alleli wild-type ma la differenza non era statisticamente significativa. La Tabella II mostra le frequenze di genotipi NER sfavorevoli, soli o in combinazione con GSTM1 nullo, secondo i tre livelli di addotti. Soggetti con genotipo XPC-PAT +/+ e XPA-A23A appartenevano al livello di addotti più alto. I pochi soggetti con genotipo sfavorevole XPC-PAT +/+ e XPA-A23A insieme con GSTM1 nullo appartenevano ai due livelli di addotti più elevati e il 75% al più elevato. Non è stata invece osservata una distribuzione anomala dei soggetti nei tre livelli di addotti nel caso di polimorfismi XPD. La Tabella III mostra i risultati dell’analisi mediante la regressione lineare multipla dell’influenza dell’esposizione occupazionale a PAH, della dieta e della abitudine al fumo, dei genotipi NER e del GSTM1 sui livelli di addotti al DNA anti-BPDE. L’aumento dei livelli di addotti era significativamente correlato Tabella I. Livelli di addotti al DNA anti-BPDE in LMF di lavoratori della cokeria esposti ad alti livelli di PAH, rapportati a genotipi GSTM1 e NER a Un valore di 1 addotto/108 nucleotidi è stato assegnato all’unico soggetto con addotti non-rilevabili (≤1 addotto/108 nucleotidi). * Comparazione statistica: Mann-Whitney U-test tra sottogruppi GSTM1, p=0.0246, z= 2.247; XPC - PAT -/-versus +/+ z=2.24 p=0.02, XPA - A23G GG versus AA e AG versus AA z=2.65 p= 0.01 e z=2.15 p=0.03. Tabella II. Frequenza di genotipi non favorevoli NER (XPC- PAT +/+, XPA- A23A; XPD-Asn312Asn e XPD- Gln751Gln), soli o in combinazione con GSTM1 nullo, rapportati ai livelli di addotti al DNA anti-BPDE a Terzili dei livelli di addotti: 1° terzile (≤2.27 addotti/ 10 8 nucleotidi), 2° terzile (>2.27 ≤4.11 addotti/ 10 8 nucleotidi) e 3° terzile(>4.11 addotti/ 10 8 nucleotidi). * Confronto Statistico: Chi 2 test tra le frequenze del 1° e 3° terzile XPC- PAT +/+ e XPA- A23A Chi 2 =5.85, p= 0.0156 e Chi 2 =5.40, p= 0.01.
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