Comunicazioni orali e Poster sul Monitoraggio biologico - Giornale ...

COMUNICAZIONI ORALI E POSTER SUL MONITORAGGIO BIOLOGICO G Ital Med Lav Erg 2004; 26:4, Suppl
94 www.gimle.fsm.it
Ulteriore modifica apportata alla metodica di Lucas et al. è
stata la sostituzione della colonna nuclosil ODS 5 µm Interchim
con la colonna C 18 ODS 5 µm Beckman. Questo ci ha permesso
di ottenere un cromatogramma più pulito e più veloce (circa 7
minuti in meno per ogni campione) di quello ottenuto da Lucas
et al. (Figura 3), peraltro da campioni incubati overnight e quindi
qualitativamente diversi dai nostri.
Infine, l’evaporazione sotto flusso di azoto è stata sostituita
con quella a sistema chiuso sottovuoto: l’uso di tale apparato ha
permesso di portare a secco un numero maggiore di campioni in
minor tempo e, fattore non trascurabile, ha ridotto il possibile rischio
di esposizione dell’analista. Inoltre, trattandosi di una centrifuga,
il campione viene concentrato sul fondo della provetta
evitandone la dispersione sulle pareti.
Le prestazioni del metodo da noi messo a punto sono:
– Separazione cromatografica: 6-OH-CHZ, CHZ e fenacetina
(IS) sono state completamente separate e non sono state osservate
interferenze con altri composti endogeni (Figura 4).
– Precisione: è stata determinata sia in termini di ripetibilità
che di riproducibilità ed espressa come coefficiente di varia-
Figura 3. Cromatogramma in UV 287 di 6-OH-CHZ (t = 6’) e
CHZ (t = 19’) ottenuto da siero dopo somministrazione orale
di CHZ 500 mg con il metodo di Lucas et al. (1993)
Figura 4. Cromatogramma in UV 287 di 6-OH-CHZ (t = 4’), fenacetina
(IS) (t = 8.3’) e CHZ (t = 14’) ottenuto col nuovo metodo;
le aree ottenute coi due metodi non sono quantitativamente
confrontabili
zione percentuale. La ripetibilità, determinata mediante misure
ripetute nell’intervallo di concentrazione 0.5-5 µg/ml, ha
dato un coefficiente di variazione compreso tra il 2 e il 6%
per il 6-OH-CHZ e tra il 4 e il 9% per il CHZ. La riproducibilità,
determinata ripetendo l’analisi dei campioni in giornate
diverse, ha dato, nello stesso intervallo di concentrazione,
un coefficiente di variazione compreso tra il 4 e il 12% per il
6-OH-CHZ e tra il 7 e il 12% per il CHZ.
– Accuratezza: è stata determinata nello stesso intervallo di
concentrazione ed è risultata variabile dal 96 al 107% per il
6-OH-CHZ e dal 93% al 110% per il CHZ.
– Sensibilità: il limite di sensibilità analitica è risultato pari a
0.05 µg/ml per il 6-OH-CHZ e a 0.25 µg/ml per il CHZ.
– Linearità: la retta di calibrazione ottenuta mostra una buona linearità
della risposta strumentale per entrambi gli analiti:
r 2 =0.9994 per il 6-OH-CHZ e r 2 =0.9996 per il CHZ (Figura 2).
Conclusioni
Il nostro metodo per la determinazione analitica contemporanea
di 6-OH-CHZ e CHZ, si è rivelato rapido, semplice e sensibile,
e pertanto più adatto ad un uso in ambito occupazionale del
metodo originario (6). L’introduzione di uno standard interno ha
notevolmente migliorato la linearità della retta di taratura, compensando
le piccole perdite di solvente durante la procedura di
estrazione. L’utilizzo di un sistema di evaporazione sotto vuoto,
nonché la sostituzione del solvente organico per l’estrazione liquido-liquido,
ha permesso di velocizzare l’analisi aumentando il
numero di campioni analizzabili in una giornata e la sicurezza
dell’operatore.
Ringraziamenti
Gli Autori ringraziano il supporto finanziario del progetto MIUR-
PRIN 2003 N.2003063319_003.
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