Comunicazioni orali e Poster sul Monitoraggio biologico - Giornale ...

COMUNICAZIONI ORALI E POSTER SUL MONITORAGGIO BIOLOGICO G Ital Med Lav Erg 2004; 26:4, Suppl
88 www.gimle.fsm.it
B. Papaleo, L. Caporossi, M. De Rosa, A. Pera
Il taxolo plasmatico quale indicatore biologico di esposizione a taxolo
ISPESL, Dipartimento di Medicina del Lavoro, Roma
RIASSUNTO. Per l’impostazione di un programma di monitoraggio
biologico di infermieri professionalmente esposti a Taxolo (Paclitaxel) è
stato messo a punto un metodo di analisi, semplice e veloce, per la determinazione
del Taxolo nel plasma, attraverso l’utilizzo della cromatografia
liquida ad alta prestazione equipaggiata con un rivelatore a serie di
diodi. Il metodo è stato validato e ha permesso la quantificazione fino ai
10 ng/ml di plasma.
Parole chiave: taxolo, livelli plasmatici, monitoraggio biologico.
ABSTRACT. TAXOL IN PLASMA AS A BIOLOGICAL MARKER OF EX-
POSURE TO TAXOL. We present a fast and simple method for the analytical
determination of Paclitaxel in human plasma. The analytical instrument
is a high performance liquid chromatograph equipped with a diode
array detector. The assay was validated and it was applied to plasma samples
of nurses occupationally exposed to taxol and the results have been
excellent, allowing evaluations of up to 10 ng/ml of plasma.
Key words: taxol, plasma levels, biological monitoring.
Introduzione
L’importanza farmacologia del Taxolo (tax-11-en-9one,4β,20-epoxy-1,2α,4,7β,10β,13α-hexahydroxy-4,10-diacetate-2-benzoato-13-(α-phenylhippurate)
iniziò ad evidenziarsi dopo
l’imponente lavoro svolto nei primi anni ’60 dal Development
Therapeutics Program (DTP), nella divisione del Cancer treatment,
per l’individuazione di nuove molecole clinicamente utili.
Il suo meccanismo d’azione a livello cellulare consente un legame
con i microtubuli cellulari, promuovendone l’assemblamento
e prevenendo la divisione cellulare senza interferire nella sintesi
delle proteine (1). Studi clinici hanno mostrato come il Taxolo
possa essere utilmente impiegato per contrastare una varietà di tumori:
alle ovaie, ai polmoni, alla mammella, al cervello, melanoma
e leucemia (2), classificandosi tra gli agenti antimitotici antitumorali
con una potente inibizione della replicazione cellulare.
È un agente antiblastico con un’alta tossicità (3), ciò nonostante,
una classificazione in base ai suoi eventuali effetti cancerogeni,
mutageni e teratogenici ancora non è stata definita. La cinetica
plasmatica del taxolo ha emivite di eliminazione molto variabili,
comprese tra le 6h e le 20h, si lega saldamente alle proteine
plasmatiche, in particolare a albumina, α-1-glicoproteina e
lipoproteine, in una quota pari circa al 95% della dose assorbita.
La principale via di eliminazione del farmaco è quella epatica,
seguita dall’escrezione biliare e accumulo nei tessuti; la quota
eliminata per via urinaria è risultata appena del 10% rispetto
alla dose assunta. Da studi condotti sul farmaco radiomercato si
è osservato che il 75% della dose è rinvenuto nelle feci (4).
Partendo da queste informazioni, in letteratura, l’indicatore
biologico risultato maggiormente sensibile per valutare la dose assorbita
è stato il taxolo plasmatico. C’è da sottolineare come non
siano ancora presenti studi su esposizioni professionali bensì
esclusivamente studi di farmacocinetica e farmacodinamica (5, 6,
7) o di valutazione delle condizioni di pazienti trattati terapeuticamente
(8) per completare il quadro delle informazioni cliniche.
Materiali e metodi
Campionamento: sono stati raccolti campioni ematici di 8
operatori addetti alla preparazione di chemioterapici antiblastici.
Il prelievo è stato effettuato alla fine del turno lavorativo setti-
manale. A ciascun operatore è stato somministrato un questionario
per la raccolta delle informazioni sulle condizioni di lavoro
con particolare attenzione alle procedure utilizzate nelle fasi di
preparazione, somministrazione e smaltimento del taxolo, con riferimento
alla frequenza ed ai DPI adottati; si sono raccolte informazioni
sulle esatte quantità di farmaco manipolate e sulla eventuale
necessità di operare preparazioni in casi di emergenza.
Procedura di analisi: i campioni biologici, sia di controllo che
di studio, sono stati raccolti in provette eparinizzate, il plasma è stato
prontamente separato dal sangue per centrifugazione e conservato
in provette di polipropilene a -20°C prima dell’analisi. Al momento
dell’analisi, dopo aver portato i campioni a temperatura ambiente,
ad una aliquota di plasma è stato aggiunto un eguale volume
di tampone acetico (pH=5.5), dopo centrifugazione a il sovranatante
è stato raccolto e analizzato. Si è eseguita una preventiva estrazione
in fase solida dell’analita dal plasma con l’utilizzo di colonnine
SPE Cyanopropyl silica. Le colonnine impaccate sono state condizionate
con una sequenza di solventi (metanolo, acqua e tampone
acetico 0.01M, pH=5.5), quindi è stato applicato il campione e si è
fatta seguire una fase di pulizia sempre con tampone acetico 0.01M
(pH=5.5) e una miscela acqua/metanolo 90:10 (v/v).l’eluizione del
taxolo è stata eseguita con 2 ml di acetonitrile/trietilammina 1000:1
(v/v) in provette di vetro, quindi evaporato sotto un leggere flusso di
azoto a 50°C. Il residuo è stato ripreso con 200 µl CH 3 OH/tampone
acetico 0.4M 3:5 v/v e iniettato in HPLC. La corsa cromatografica
è stata eseguita con una colonna C8, in condizioni isocratiche, la fase
mobile è consistita in una miscela CH 3 CN/CH 3 OH/tampone acetico
0.05M 56:14:30, con un flusso 1.0 ml/min. La rivelazione è stata
compiuta con un rivelatore a serie di diodi, monitorando l’assorbimento
alla lunghezza d’onda di 227 nm. Il taxolo ha mostrato un
tempo di ritenzione di 3.36 minuti.
Risultati e Discussione
Studio di validazione: il metodo è stato validato. La curva di
calibrazione ha indicato un’ottima linearità di risposta nel range
5-500 ng/ml (coefficiente di correlazione R=0.9998); i recuperi
sono risultati tutti superiori all’87%; il limite di rilevabilità è stato
fissato a 10 ng/ml. Precisione e accuratezza sono stati calcolati
intra-day e inter-day per quattro campioni di controllo in quadruplicato
dando ottimi risultati (maggiori del 94%).
Esiti del monitoraggio: i campioni analizzati sono stati raccolti
in tre ospedali diversi, per avere una eventuale indicazione
sui potenziali effetti delle differenti condizioni di lavoro. In quelle
strutture sanitarie di più recente costruzione, in cui le strategie
di prevenzione, ed in particolare l’adozione delle misure di protezione
collettiva ed individuale, sono più organizzate l’esito del dosaggio
plasmatico di taxolo non ha evidenziato esposizioni particolari,
come prevedibile. Solo in un caso si è ottenuto un dato superiore
al nostro limite di rilevabilità; questo risultato è stato interpretato
come condizionato dalla storia lavorativa dell’infermiera
in esame, caratterizzata da una elevata anzianità lavorativa.
Conclusioni
Il metodo presentato risulta essere facilmente applicabile, veloce
e realizzabile con costi notevolmente contenuti rispetto ad