Revista Newslab Edição 166

iológicos citados anteriormente29.
Com a grande variedade de métodos
testados em diversos países, foram
testados no Brasil quatro métodos de
PCR que tiveram suas especificidade
e sensibilidade comparadas, como é
mostrado na Tabela 2.
Observando os resultados obtidos
pôde-se notar que a real-time
PCR se mostrou mais sensível
e específica que as outras três
técnicas testadas, isso pode ser
explicado pela diminuição de
etapas da técnica, evitando maior
tempo de manipulação da amostra
e assim, evitando possíveis erros
relacionados a isso 36 .
Na França foi observado que o T.
gondii é melhor detectado na PCR
quantitativa utilizando o gene REP-
529 ao invés do até então utilizado
gene B137, o primeiro se repete
cerca de 200 vezes no genoma do
parasita enquanto que o segundo
se repete apenas 35 vezes 23 , porém
estudos mostraram que há variações
no número de repetições de ambos
os genes dependendo da cepa do
parasita estudada 38 . Assim, devido
ao seu maior número de repetições,
o REP-529 tornaria possível detectar
precocemente uma baixa carga
parasitária nas amostras do paciente.
Entretanto, na América do Sul os
resultados não foram reprodutíveis,
acredita-se que as cepas de T. gondii
que possuímos aqui sejam diferentes
e mais patogênicas do que as
européias, sendo assim o gene B1
foi mais sensível e específico para
os casos daqui do que o gene REP-
52939, entretanto o gene B1 também
apresenta a desvantagem de
amplificar determinadas regiões dos
cromossomos humanos, tornando
necessária uma avaliação cuidadosa
dos resultados 17 . O gene B1 acabou
gerando duas vezes mais resultados
falso-negativos do que o gene REP-
529 em um estudo realizado por
Hierl et al. na Alemanha em 200434.
A grande diversidade de cepas já
isoladas do parasita (cerca de 1500)
acaba fazendo com que nem todas
as técnicas de PCR padronizadas e
testadas na Europa funcionem aqui e
vice versa, por esse motivo ressaltase
a importância dos trabalhos feitos
no Brasil29, nota-se também que
as altas sensibilidades encontradas
nas técnicas de PCR executadas aqui
no Brasil e em Cuba (de 69 a 83%)
podem estar relacionadas à alta
virulência do parasita 23 .
Devido à alta prevalência de
toxoplasmose na França, acabou
sendo criado um guia de controle de
qualidade para que as diversas técnicas
moleculares utilizadas nos laboratórios
sigam determinadas normas para
evitar resultados falso-positivos e
falso-negativos 40 . A grande dificuldade
de padronização das técnicas está no
fato de que a grande maioria delas é
desenvolvida in house e cada laboratório
adota uma metodologia diferente 41 . Na
Líbia, Gashout et al. (2016) conseguiram
padronizar uma técnica de seminested-PCR
que foi capaz de detectar
concentrações mínimas do T. gondii nos
fluídos corporais analisados, mostrando
especificidade e sensibilidade
elevadíssimas, fazendo com que a
realização de PCR na rotina clínica se
torne algo cada vez mais próximo 42 .
ARTIGO CIENTÍFICO I
Revista NewsLab Edição 166 | Julho 2021
0 25