Tanenlerin fotometrin miktar tayini - Ankara Üniversitesi Kitaplar ...

Saponinlerin tanıma reaksiyonlan:
a) Köpürme deneyi: 0,5 g toz edilmiş numune 10 ml sıcak su ile beraber
bir deney tübüne konur, soğuduktan sonra takriben 10 saniye kadar
kuvvetle çalkalanır. Saponozit mevcutsa en az 10 dakika sabit kalan 1-
10 cm yüksekliğinde ve üzerine 1-2 damla 2 N HCI ilavesiyle kaybolmayan
bir köpük tabakası meydana gelir.
b) Hemoliz deneyi: 0,5 g toz edilmiş numune, 50 ml izotonik fosfat tampon
çözeltisiyle kısa bir müddet kaynatılır, soğutulur, süzülür. 1 ml
süzüntü 1 ml kan çözeltisi (%2) ile karıştırılır. Tanen içermeyen
numunelerde 0,2 ml süzüntü 0,8 ml tampon çözeltisi ile seyreltilir ve
bunun üzerine 1 ml kan çözeltisi (%2) konur. 30 dakika içinde hemoliz
meydana gelirse numunede saponozit olabileceğine karar verilir.
İzotonik fosfat tampon çözeltisi hazırlanması: 16 g NaaHPCU (130°C da
sabit vezne getirilmiş) ve 4,4 g NaH2PC>4. 2 H2O suda çözülüp 1000 ml
ye tamamlanır. Stabiliteyi arttırmak için 0,1 g NaF ilave edilebilir.
Kan çözeltisi (%2) hazırlanması: Bir mezür 10 ml tersiyer sodyum sitrat
çözeltisinden (3,65 g C6 H5 O7 Na3 . 5 1/2 H2O+100 ml su) konur ve
hafifçe çalkalanarak iç cidar ıslatılır. Bunun üzerine 100 ml çok taze sığır
kanı ilave edilerek hemen kanştınlır. Bu sitratlı kan buzdolabında bir hafta
saklanabilir. 2 ml sitratlı kan izotonik fosfat tampon çözeltisi ile 100 ml ye
tamamlanır ve tekrar kanştınlır. Bu şekilde hazırlanan kan çözeltisi (%2)
27
81