Download - Fakultät 06 - Hochschule München

Validierungsplan eines Chromatographie-Datensystems
In der HPLC unterscheidet man zwei Arbeitsweisen:
1. isokratisch:
Dabei bleibt die Zusammensetzung des Eluenten und die Fließmittelstärke während
des Trennvorganges konstant.
2. Gradientenelution:
Der Eluent wird während des Trennvorgangs variabel zusammengesetzt und die
Fließmittelstärke erhöht.
Wie man oben in Abbildung 3 erkennen kann, wandern die einzelnen Substanzen
eines Stoffgemisches unterschiedlich schnell durch die Trennsäule und somit durch
den gesamten Kreislauf. Dabei kann es dazu kommen, dass der gesamte
Analysevorgang viel zu lange dauert oder die einzelnen Peaks zu sehr abflachen. Es
entsteht das Problem, die Peak-Grenzen für die softwareinterne Flächenintegration
nicht mehr genau definieren zu können, wodurch die einwandfreie
Konzentrationsbestimmung einer Teil-Substanz nicht mehr gewährleistet ist.
Um diesem Problem Abhilfe zu schaffen, verwendet man die Gradientenelution.
Hierbei verwendet man zwei oder mehrere mobile Phasen( = Eluenten ). Zunächst
wird nur ein Eluent eingesetzt, bis die ersten Substanzen durch die Säule diffundiert
sind. Dann erst wird die zweite mobile Phase allmählich beigemischt und erreicht so,
dass auch die letzten Substanzen zügig und mit einem halbwegs schlanken Peak aus
der Säule kommen.
Wenn hingegen, bei einfacheren Aufgaben, nur ein Eluent ausreicht, spricht man von
einer isokratischen Trennung.
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