Rasterkraftmikroskopische Untersuchungen an nativen biologischen ...

GRUNDLAGEN UND METHODEN
2 Substrate für SFM an biologischen Materialien
aufgeschwemmt, danach auf gleiche Weise mit Laminin beschichtet (Lamininlösung 20 µg/ml in
0,8 mM Tris; 2,4 mM NaCl; pH 7,4) und wieder für 1 h bei 37 ◦ C inkubiert. Dann erfolgte Waschen
in PBS und Aufbringen der Zellsuspension (s. Zellkultur). Für einige Messungen wurden nur mit
Laminin beschichtete sowie unbeschichtete Deckgläser verwendet (s. Ergebnisse).
2.3 Polymersubstrate für biologische Materialien
2.3.1 Substrate aus Polyvinylphenylketon (PVPK)
PVPK ist ein amorpher Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 74 - 84 ◦ C (Angabe des Herstellers).
Festes und gelöstes PVPK wird gewöhnlich als polymerer Photosensitizer verwendet (Daly, 1987).
Als Unterlage für PVPK wurden zunächst dünne Plättchen aus Polystyrol mit einer Dicke von etwa
0,5 mm hergestellt, indem geschmolzenes Polystyrol zwischen zwei Deckgläsern gequetscht
wurde. Diese etwa 1 cm 2 großen Plättchen wurden nach Abnehmen des oberen Deckgläschens
abermals, zusammen mit einem kleinen Stück PVPK auf der Mitte des Plättchens, geschmolzen.
Das ziemlich spröde PVPK erfordert als stabilisierende Unterlage ein Material mit ähnlichem thermischem
Ausdehnungskoeffizienten. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur bildet das PVPK
mit Polystrol ein festes Verbundmaterial und die PVPK-Oberfläche kann direkt mit Laminin beschichtet
werden. Dies geschah durch Aufbringen eines Tropfens einer wässrigen Lamininlösung
(20 µg/ml in 0,8 mM Tris; 2,4 mM NaCl; pH 7.4) und Inkubation für 1 h bei 37 ◦ C. Danach konnten
auf diesem Substrat Zellkulturen angelegt werden. Für die kraftmikroskopische Untersuchung
wurden die Substratplättchen auf den verspiegelten Präparateträger (siehe 5.1) oder nur auf eine
Unterlage aus Stahl geklebt, um deren Befestigung am Scanner zu ermöglichen (Abb. 10).
2.3.2 Substrate aus Furan-Polymer (FP)
Harze aus 2-Furanmethanol sind besonders geeignet zur Herstellung von Substraten für rasterkraftmikroskopische
Untersuchungen. Das Monomer polymerisiert spontan bei Säurekatalyse (Gandini,
1987). Die hierfür verwendete Säure sollte gut in dem Harz lösbar sein und darf bei der
Reaktionstemperatur nicht verdampfen. Die Verwendung halogenhaltiger Säuren muss vermieden
werden, da in dem Harz Formaldehyd als Zwischenprodukt gebildet wird. 2-Furanmethanol ist
eine Flüssigkeit (und ein gutes Lösungsmittel), so dass die Kondensationsreaktion ohne Zusatz
eines weiteren Lösungsmittels durchgeführt werden kann. Das bei der Polymerisation entstehende
Wasser verdampft während des Prozesses, vorausgesetzt der Polymerfilm ist dünn genug. Durch
das schnelle Entweichen von Wasser wird das Polymer sehr kompakt und bildet eine sehr glatte
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