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68 3 MATERIAL UND METHODEN 3.2.2 Nährmedien Für die kulturell-bakteriologischen Untersuchungen wurden die in Tabelle 2 aufgeführten Medien eingesetzt. Tab. 2: Verwendete Medien, Hersteller und Verwendungszweck Medium Standard-I-Nährbouillon PBS-Lösung (Phosphate Buffered Saline), pH 7,4 Natriumchlorid Brolacin-Agar (Bromthymolblau-Lactose- Cystin-Agar) TBG-Bouillon, modifiziert (Tetrathionat-Brilliantgrün- Galle-Anreicherungsbouillon) BPLS-Agar (Brilliantgrün- Phenolrot-Lactose- Saccharose-Agar), modifiziert BPLS100 (BPLS-Agar mit 100 mg/l Nalidixinsäure) Novobiocin Nalidixinsäure Hersteller/ Artikelnummer Merck, Darmstadt/ 1.07882.0500 Sigma, Steinheim/ P-3813 Merck, Darmstadt/ 1.06404.0500 Merck, Darmstadt/ 1.01638.0500 Merck, Darmstadt/ 1.05178.0500 Oxoid; Wesel/ CM329 Oxoid, Wesel/ Spezialanfertigung Merck, Darmstadt/ CALB 491209 Fluka, Neu-Ulm/ 70162 Verwendung Vermehrung von Salmonellen Verdünnungsreihen; Verdünnungslösung physiologische Natriumchlorid-Lösung: Inokulum der Kontrolltiere; Verdünnungslösung Keimzahlbestimmung selektive Anreicherung der Salmonellen aus dem Untersuchungsmaterial Isolierung von Salmonellen aus klinischem Material Isolierung von Salmonellen aus Untersuchungsmaterial mit Begleitflora Unterdrückung von Proteus Zusatz zu BPLS-Agar: Hemmung der Begleitflora aus dem Untersuchungsmaterial
3 MATERIAL UND METHODEN 69 Die Basisnährmedien wurden nach Herstellerangaben zubereitet. Zusätze wie Antibiotika wurden nach Abkühlen der Medien auf 50 °C hinzugefügt und homogen verteilt. Die Zusammensetzung der verwendeten Nährmedien und ihre Herstellung ist unter 9.1 im Anhang aufgeführt. Alle mit Salmonellen beimpften Medien wurden 24 Stunden bei 37 °C im aeroben Milieu in einem Brutschrank inkubiert. 3.2.3 Keimzahlbestimmung Die Bestimmung der Keimzahl bzw. der Kolonie bildenden Einheiten (KbE) erfolgte mit dem Oberflächen-Spatelverfahren. Dazu wurden die in Standard-I-Bouillon in Reinkultur angezüchteten Salmonellen-Teststämme mittels einer um den Faktor 10 fallenden Verdünnungsreihe bis 10 -9 verdünnt. Um die Verdünnungsstufe 10 -1 zu erhalten, wurde von der Bouillon 1 ml entnommen und zu 9 ml Verdünnungslösung (PBS-Lösung) gegeben und mittels eines Reagenzglasschüttlers (Vortex Genie, Fa. Scientific Industries, New York) gemischt. Die Herstellung weiterer Verdünnungsstufen erfolgte entsprechend. Von den Verdünnungsstufen 10 -6 bis 10 -9 wurden jeweils 0,1 ml im Doppelansatz auf Brolacin-Agar ausgestrichen. Die beiden höchsten Verdünnungsstufen, auf denen ein Wachstum von Kolonien verzeichnet werden konnte, wurden ausgezählt und unter Berücksichtigung der inokulierten Menge mit dem gewogenen arithmetischen Mittel die Keimzahl pro 1 ml Reinkultur errechnet.
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Wissenschaftliche Betreuung: PD Dr.
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DANKSAGUNG Herrn Priv. Doz. Dr. G.
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